α-亞麻酸預處理對LPS誘導小鼠急性肺損傷的作用及機制研究.pdf

1、目的：
　　急性肺損傷(ALI)和急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)已經(jīng)成為危重病患者主要的致死原因之一。急性肺損傷可由多種因素觸發(fā)產(chǎn)生，如休克、膿毒癥、創(chuàng)傷、燒傷、重癥肺炎和急性胰腺炎等。近期研究發(fā)現(xiàn)，n-3多不飽和脂肪酸對多個病種有益，如類風濕關(guān)節(jié)炎、哮喘、腸炎、動脈粥樣硬化、神經(jīng)退行性病變和心血管疾病。α-亞麻酸(ALA)是多不飽和脂肪酸(PUFAs)的重要成員之一，其表現(xiàn)出強效抗炎特征。目前，α-亞麻酸在急性肺損傷(ALI)中

2、的作用尚不清楚。本研究旨在評估α-亞麻酸對脂多糖(LPS)誘導的急性肺損傷的保護作用并探討可能作用機制。
　　方法：
　　1、氣管內(nèi)注射LPS（1mg/kg）建立急性肺損傷的動物模型。雄性C57BL/6小鼠，隨機分為四組:假手術(shù)組（Sham）:氣管內(nèi)注射生理鹽水(1mg/kg);LPS組(LPS):氣管內(nèi)注射LPS(1mg/kg);α-亞麻酸低劑量組(ALA360mg/kg):腹腔注射α-亞麻酸，1h后氣管內(nèi)注射LPS（1m

3、g/kg）;α-亞麻酸高劑量組（ALA1800mg/kg）:腹腔注射α-亞麻酸，1h后氣管內(nèi)注射LPS（1mg/kg）。
　　2、各組均隨機取C57BL/6小鼠6只，造模成功6h后，收集支氣管肺泡灌洗液并檢測其中的蛋白濃度、細胞因子（TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10）水平以及炎癥細胞（總細胞、中性粒細胞、巨噬細胞）數(shù);肺組織經(jīng)灌洗后進行TUNEL染色。
　　3、各組均隨機取C57BL/6小鼠6只，造模成功6h后，

4、取小鼠肺組織，檢測其干濕重比。
　　4、各組均隨機取C57BL/6小鼠6只，造模成功6h后，選取右上肺葉進行HE染色，檢測肺組織的損傷情況;其余肺組織檢測髓過氧化物酶(MPO)，丙二醛(MDA)，超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的表達水平。
　　5、各組均隨機取C57BL/6小鼠6只，造模成功6h后，取小鼠肺組織，用蛋白印跡法檢測caspase-3、IκBα和NF-κB(p65)的蛋白表達情況。
　　6、體

5、外培養(yǎng)RAW264.7細胞系，α-亞麻酸(10μM、100μM)預處理1小時后，LPS（1μg/ml）刺激6小時，取細胞上清檢測巨噬細胞分泌細胞因子(TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10)的水平;取細胞提取蛋白后檢測caspase-3、IκBα和NF-κB(p65)的蛋白表達情況。
　　結(jié)果：
　　1、LPS組小鼠支氣管肺泡灌洗液中的蛋白濃度，TNF-α、IL-6、IL-1β的水平顯著高于Sham組（P值均小于0.0

6、1）;α-亞麻酸預處理組小鼠支氣管肺泡灌洗液中的蛋白濃度，TNF-α，IL-6、IL-1β水平顯著低于LPS組（P值均小于0.05）;LPS組小鼠支氣管肺泡灌洗液中IL-10水平與Sham組無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，但α-亞麻酸高劑量組IL-10水平顯著高于LPS組(P＜0.01); LPS組小鼠支氣管肺泡灌洗液中的細胞總數(shù)和中性粒細胞數(shù)顯著高于Sham組(P＜0.01)，α-亞麻酸預處理組小鼠支氣管肺泡灌洗液中的細胞總數(shù)和中性粒細

7、胞數(shù)顯著低于LPS組（P值均小于0.01）;LPS組中巨噬細胞數(shù)顯著低于Sham組(P＜0.01)，而α-亞麻酸預處理可呈劑量依賴性的逆轉(zhuǎn)此降低趨勢（P值均小于0.05）;α-亞麻酸組中肺組織TUNEL染色顯示細胞凋亡顯著少于LPS組，染色陽性細胞比例顯著降低（P值均小于0.01）。
　　2、α-亞麻酸組肺組織干濕重比顯著低于LPS組（P值均小于0.01）。
　　3、α-亞麻酸組中肺組織病理損傷程度顯著輕于LPS組（P值均小

8、于0.05）;α-亞麻酸組肺組織中的MPO和MDA的水平顯著低于LPS組（P值均小于0.05），同時SOD和GSH的活性明顯高于LPS組（P值均小于0.05）。
　　4、α-亞麻酸組肺組織的caspase-3、磷酸化的IκBα和NF-κβ(p65)蛋白表達水平顯著低于LPS組。
　　5、LPS刺激RAW264.7細胞系6h后，LPS組細胞上清中TNF-α，IL-6、IL-1β水平顯著高于Sham組（P值均小于0.05），IL

9、-10水平無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);而α-亞麻酸預處理組細胞上清中的TNF-α，IL-6、IL-1β水平顯著低于LPS組(P值均小于0.05)，且IL-10水平也無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。另外，LPS刺激RAW264.7細胞系6h后，caspase-3、磷酸化的IκBα和NF-κB(p65)蛋白表達水平顯著低于LPS組。
　　結(jié)論：
　　α-亞麻酸可以有效的保護LPS導致的急性肺損傷，NF-κB通路可能在α-亞麻酸介