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文檔簡介
1、目的:
急性肺損傷(ALI)和急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)已經(jīng)成為危重病患者主要的致死原因之一。急性肺損傷可由多種因素觸發(fā)產(chǎn)生,如休克、膿毒癥、創(chuàng)傷、燒傷、重癥肺炎和急性胰腺炎等。近期研究發(fā)現(xiàn),n-3多不飽和脂肪酸對多個病種有益,如類風濕關(guān)節(jié)炎、哮喘、腸炎、動脈粥樣硬化、神經(jīng)退行性病變和心血管疾病。α-亞麻酸(ALA)是多不飽和脂肪酸(PUFAs)的重要成員之一,其表現(xiàn)出強效抗炎特征。目前,α-亞麻酸在急性肺損傷(ALI)中
2、的作用尚不清楚。本研究旨在評估α-亞麻酸對脂多糖(LPS)誘導的急性肺損傷的保護作用并探討可能作用機制。
方法:
1、氣管內(nèi)注射LPS(1mg/kg)建立急性肺損傷的動物模型。雄性C57BL/6小鼠,隨機分為四組:假手術(shù)組(Sham):氣管內(nèi)注射生理鹽水(1mg/kg);LPS組(LPS):氣管內(nèi)注射LPS(1mg/kg);α-亞麻酸低劑量組(ALA360mg/kg):腹腔注射α-亞麻酸,1h后氣管內(nèi)注射LPS(1m
3、g/kg);α-亞麻酸高劑量組(ALA1800mg/kg):腹腔注射α-亞麻酸,1h后氣管內(nèi)注射LPS(1mg/kg)。
2、各組均隨機取C57BL/6小鼠6只,造模成功6h后,收集支氣管肺泡灌洗液并檢測其中的蛋白濃度、細胞因子(TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10)水平以及炎癥細胞(總細胞、中性粒細胞、巨噬細胞)數(shù);肺組織經(jīng)灌洗后進行TUNEL染色。
3、各組均隨機取C57BL/6小鼠6只,造模成功6h后,
4、取小鼠肺組織,檢測其干濕重比。
4、各組均隨機取C57BL/6小鼠6只,造模成功6h后,選取右上肺葉進行HE染色,檢測肺組織的損傷情況;其余肺組織檢測髓過氧化物酶(MPO),丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)的表達水平。
5、各組均隨機取C57BL/6小鼠6只,造模成功6h后,取小鼠肺組織,用蛋白印跡法檢測caspase-3、IκBα和NF-κB(p65)的蛋白表達情況。
6、體
5、外培養(yǎng)RAW264.7細胞系,α-亞麻酸(10μM、100μM)預處理1小時后,LPS(1μg/ml)刺激6小時,取細胞上清檢測巨噬細胞分泌細胞因子(TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10)的水平;取細胞提取蛋白后檢測caspase-3、IκBα和NF-κB(p65)的蛋白表達情況。
結(jié)果:
1、LPS組小鼠支氣管肺泡灌洗液中的蛋白濃度,TNF-α、IL-6、IL-1β的水平顯著高于Sham組(P值均小于0.0
6、1);α-亞麻酸預處理組小鼠支氣管肺泡灌洗液中的蛋白濃度,TNF-α,IL-6、IL-1β水平顯著低于LPS組(P值均小于0.05);LPS組小鼠支氣管肺泡灌洗液中IL-10水平與Sham組無統(tǒng)計學差異(P>0.05),但α-亞麻酸高劑量組IL-10水平顯著高于LPS組(P<0.01); LPS組小鼠支氣管肺泡灌洗液中的細胞總數(shù)和中性粒細胞數(shù)顯著高于Sham組(P<0.01),α-亞麻酸預處理組小鼠支氣管肺泡灌洗液中的細胞總數(shù)和中性粒細
7、胞數(shù)顯著低于LPS組(P值均小于0.01);LPS組中巨噬細胞數(shù)顯著低于Sham組(P<0.01),而α-亞麻酸預處理可呈劑量依賴性的逆轉(zhuǎn)此降低趨勢(P值均小于0.05);α-亞麻酸組中肺組織TUNEL染色顯示細胞凋亡顯著少于LPS組,染色陽性細胞比例顯著降低(P值均小于0.01)。
2、α-亞麻酸組肺組織干濕重比顯著低于LPS組(P值均小于0.01)。
3、α-亞麻酸組中肺組織病理損傷程度顯著輕于LPS組(P值均小
8、于0.05);α-亞麻酸組肺組織中的MPO和MDA的水平顯著低于LPS組(P值均小于0.05),同時SOD和GSH的活性明顯高于LPS組(P值均小于0.05)。
4、α-亞麻酸組肺組織的caspase-3、磷酸化的IκBα和NF-κβ(p65)蛋白表達水平顯著低于LPS組。
5、LPS刺激RAW264.7細胞系6h后,LPS組細胞上清中TNF-α,IL-6、IL-1β水平顯著高于Sham組(P值均小于0.05),IL
9、-10水平無統(tǒng)計學差異(P>0.05);而α-亞麻酸預處理組細胞上清中的TNF-α,IL-6、IL-1β水平顯著低于LPS組(P值均小于0.05),且IL-10水平也無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。另外,LPS刺激RAW264.7細胞系6h后,caspase-3、磷酸化的IκBα和NF-κB(p65)蛋白表達水平顯著低于LPS組。
結(jié)論:
α-亞麻酸可以有效的保護LPS導致的急性肺損傷,NF-κB通路可能在α-亞麻酸介
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