軟骨下骨成骨細胞調(diào)節(jié)小鼠創(chuàng)傷性關節(jié)炎發(fā)病的研究.pdf

1、目的:骨性關節(jié)炎(OA)是臨床最為常見的骨退行性疾病，有著極高的發(fā)病率。在OA病理過程中，除軟骨破壞外，關節(jié)骨贅形成，關節(jié)周圍滑膜組織增生，軟骨下骨異常改變都是重要的病理改變。過往的研究證實，軟骨下骨的病變不僅貫穿了整個OA的病程，也極有可能是OA病理進展過程的重要影響因素。然而，軟骨下骨調(diào)控OA病程的具體機制目前尚不清楚，另一方面，軟骨下骨成骨細胞對OA病程的作用更加鮮有報道。因此，本課題詣在探討軟骨下骨成骨細胞對OA病程的調(diào)節(jié)作用及

2、其相應作用機制并篩選潛在的分子靶點。
　　方法:本研究中，筆者主要通過三方面探討軟骨下骨成骨細胞對OA病程的作用。1、利用野生小鼠行ACLT（前交叉韌帶離斷）造模，在造模后2周，4周時間點分別觀察小鼠軟骨下骨的mTORC1信號通路標記蛋白P-s6的表達，并通過影像學組織學觀察造模后軟骨下骨的形態(tài)學、生理學改變，同時通過免疫熒光雙標技術與特異性染色技術明確ACLT造模后軟骨下骨mTORC1信號改變的靶細胞;2、利用空間基因打靶技術，

3、構建成骨細胞特異性mTORC1過活化小鼠模型，在ACLT造模后早期（2周）通過組織學，影像學方法評估小鼠的關節(jié)退變與軟骨下骨改變，另外，在造模的同時給予小鼠雷帕霉素喂養(yǎng)并通過組織學，影像學評估條件敲除小鼠的關節(jié)退變與軟骨下骨改變;3、基于方法1，2部分的動物模型，通過組織學評估軟骨下骨基質(zhì)細胞衍生因子-1（SDF-1）的表達情況，另一方面，提取野生小鼠與基因敲除小鼠的成骨細胞，經(jīng)或不經(jīng)雷帕霉素處理后提取細胞培養(yǎng)基與mRNA后，通過ELI

4、SA與定量pcr評估SDF-1的釋放，再將以上細胞模型與軟骨細胞共培養(yǎng)，利用定量pcr法檢測軟骨肥大（慢慢MMP-13）的表達。
　　結果:1、在野生小鼠ACLT造模后2周與4周，ACLT小鼠關節(jié)軟骨下骨中的成骨細胞呈現(xiàn)mTORC1信號的顯著活化，軟骨下骨出現(xiàn)成骨增生的增加;2、過度活化軟骨下骨成骨細胞中的mTORC1信號通路除了加速ACLT造模后的關節(jié)退變，還可增加ACLT造模后的軟骨下骨骨性增生，而雷帕霉素喂養(yǎng)可以有效逆轉(zhuǎn)以上

5、病變;3、SDF-1在野生小鼠與基因敲除小鼠ACLT造模早期的軟骨下骨中均出現(xiàn)高表達，而雷帕霉素喂養(yǎng)可逆轉(zhuǎn)以上情況;另一方面，雷帕霉素可降低敲除小鼠的成骨細胞中的SDF-1釋放;而成骨細胞分泌的SDF-1可加速前體軟骨細胞的肥大與凋亡。
　　結論:在創(chuàng)傷性OA病程中軟骨下骨成骨細胞關鍵信號通路(mTORC1)的激活可提高關鍵細胞因子(SDF-1)分泌與釋放并最終對關節(jié)軟骨退變的重要的調(diào)控作用。鑒于目前OA尚無有效的臨床治療用藥，針