Neuregulin-1對冠狀動脈平滑肌細(xì)胞功能的影響.pdf

1、目的：檢測Neuregulin-1因子處理對冠狀動脈平滑肌細(xì)胞增殖、遷移、存活和蛋白表達的影響。
　　方法：選用第3-6次傳代的人冠脈平滑肌細(xì)胞(HCASMC)，當(dāng)培養(yǎng)的細(xì)胞鋪滿瓶底的90％左右或者長成融合單層后即可加入Neuregulin-1(NRG-1，下同)進行實驗。依據(jù)不同濃度NRG-1處理正?；蛉毖毖跖囵B(yǎng)條件下的HCASMC進行實驗分組。運用MTT法檢測不同濃度的NRG-1對HCASMC增殖影響，Transwell24

2、孔板法檢測不同濃度的NRG-1對HCASMC遷移影響;Hoechst33342核染色法檢測NRG-1對HCASMC凋亡率的影響;Western blot檢測正常培養(yǎng)條件下NRG、ErbB2/3/4、磷酸化ErbB2受體、磷酸化ErbB3受體、磷酸化ErbB4受體以及缺血缺氧條件下促血管生成因子-1（Ang-1）、促血管生成因子-2(Ang-2)和血管內(nèi)皮生成因子(VEGF)在HCASMC中的表達水平。
　　結(jié)果：1、HCASMC生

3、長特點:培養(yǎng)的HCASMC為貼壁細(xì)胞，形態(tài)呈成纖維樣的長梭形、桿狀或者蚯蚓型;缺血缺氧條件下形態(tài)比較瘦長，數(shù)量減少，生長緩慢，易成團，細(xì)胞碎片較多。
　　2、正常培養(yǎng)時，HCASMC表達ErbB2/3/4、不表達NRG;加入NRG-1處理后的HCASMC磷酸化ErbB2/3/4增加（P＜0.05），加入抑制劑后磷酸化ErbB2/3/4的表達減少（P＜0.05）;
　　3、不同濃度的NRG-1對HCASMC增殖影響結(jié)果不同，1

4、0ng/mlNRG-1組促進HCASMC增殖的作用最明顯[（0.314±0.044）＞(0.239±0.044)，OD值，下同，P＜0.05]，在加入抑制劑后，這種促進增殖的作用是受到抑制的[（0.188±0.039）＜(0.314±0.044)，P＜0.05)];在加入抑制劑的50ng/mlNRG-1組，促進HCASMC增殖作用不明顯[（0.227±0.045）＜(0.239±.0441），P＞0.05）]。
　　4、不同濃度的

5、NRG-1對HCASMC遷移影響結(jié)果不同，在9H內(nèi)，10ng/ml組促進HCASMC遷移的作用最明顯[（32.2±5.9）個＞(25±3.8)個，P＜0.05]，在加入抑制劑后，這種促進增殖的作用是受到抑制的[（17.1±4.5）個＜（32.2±5.9）個，P＜0.0S]，在加入抑制劑的50ng/ml NRG-1組，促進HCASMC遷移作用不明顯[（21.7±4.9）個＜（25±3.8）個，P＞0.05]。
　　5、在熒光顯微鏡下

6、，Hoechst33342使缺血缺氧作用24H后的HCASMC凋亡細(xì)胞容易辨認(rèn)，核固縮、發(fā)亮、碎裂、成團即為凋亡細(xì)胞，而細(xì)胞生長數(shù)量也明顯減少，和對照組比較，缺血缺氧HCASMC凋亡率（凋亡率=凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)％）增加[（12.417±3.5）％＞（4.841±1.1）％，P＜0.05）];在加入NRG-1處理后的NRG-1組的細(xì)胞凋亡率，較缺血缺氧組明顯降低[（6.720±1.3）％＜（12.417±3.5）％，P＜0.05）];

7、與NRG-1+抑制劑組比較，NRG-1降低凋亡率的作用被抑制[（6.720±1.3）％＜(11.368±2.4)％,P＜0.05)]。
　　6、缺血缺氧時，HCASMC表達VEGF、Ang-1較對照組增加(P＜0.05)，加入100ng/ml的NRG-1處理后，VEGF、Ang-1的表達較缺血缺氧組增加（P＜0.05），加入抑制劑后的NRG-1+抑制劑組，VEGF、Ang-1的表達減少(P＜0.05)，而對照組和實驗組的Ang-2

8、表達暫無明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：1、HCASMC表達ErbB2/3/4、不表達NRG，NRG-1干預(yù)后，能促進HCASMC磷酸化ErbB2/3/4的表達，說明NRG-1可激活并增強NRG/ErbB信號通路;
　　2、不同濃度的NRG-1干預(yù)對HCASMC增殖的影響不同，濃度為10ng/ml的NRG-1能明顯促進HCASMC增殖，可以推測，合適濃度的NRG-1通過促進HCASMC的增殖，從而促進其在冠脈血管生成發(fā)

9、揮作用;
　　3、不同濃度的NRG-1干預(yù)對HCASMC遷移的影響不同，濃度為10ng/ml的NRG-1能明顯促進HCASMC遷移，可以推測，合適濃度的NRG-1通過促進HCASMC的遷移，從而促進其在冠脈血管生成發(fā)揮作用。
　　4、缺血缺氧時，NRG-1對HCASMC凋亡產(chǎn)生影響，主要為降低HCASMC的凋亡率，從而保護HCASMC。
　　5、缺血缺氧時NRG-1能促進HCASMC表達VEGF、Ang-1，從而促進冠