轉(zhuǎn)染TDP-25對SH-SY5Y細胞自噬蛋白表達及細胞活力、凋亡的影響.pdf

1、背景：
　　肌萎縮性側(cè)索硬化癥（amyotrophic lateral sclerosis，ALS）是一種最常見且致命的運動神經(jīng)元疾病，主要表現(xiàn)為進行性肌無力、肌萎縮等，目前仍無有效的治療方案，最終常因呼吸衰竭或肺部感染而死亡，從發(fā)現(xiàn)臨床癥狀起，平均生存期一般為2-4年，10年的生存期的患者只占5-10％。額顳葉變性(frontotemporal lobar degeneration，F(xiàn)TLD）是一種較為常見的癡呆性疾病，主要以行

2、為異常、運動障礙和言語障礙等臨床癥狀為主，絕大數(shù)患者發(fā)病年齡在45-65歲之間，病程2-20年之間不等，平均8年左右，目前本病仍無法治愈。兩者的臨床癥狀和病理特點具有一定的重疊性，說明它們可能是同一種神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，只是選擇性地影響不同的易感神經(jīng)元。Neumann等人研究發(fā)現(xiàn)大多數(shù)ALS和FTLD-TDP患者腦組織中存在TDP-43陽性包涵體，主要成分為泛素化、磷酸化的TDP-43及其截斷型片段（TDP-25和TDP-35），然而關(guān)于

3、TDP-25的報道很少，它如何參與ALS和FTLD的發(fā)病機制仍不清楚。
　　目的：
　　探討TDP-43截斷型片段TDP-25對細胞自噬相關(guān)蛋白表達及細胞活力、凋亡的影響。
　　方法：
　　分別轉(zhuǎn)染GFP-N1、GFP-TDP-43和GFP-TDP-25三種質(zhì)粒的神經(jīng)母細胞瘤細胞SH-SY5Y分為三組，24h后應(yīng)用免疫熒光法檢測包涵體的存在及其分布；應(yīng)用Western blot實驗檢測蛋白LC3、Beclin-1

4、的表達情況；將SH-SY5Y細胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒GFP-TDP-25后分為兩組，一組加入3-MA自噬抑制劑，另一組不做處理，MTT比色法檢測細胞活力；Annexin-V-FITC/PI檢測細胞凋亡情況。
　　結(jié)果：
　　1.GFP-N1組細胞核、胞質(zhì)中均可見綠色熒光信號；GFP-TDP-43組綠色熒光信號主要分布于細胞核，未見明顯的TDP-43向胞質(zhì)中異位，且未見明顯的包涵體形成；GFP-TDP-25組較強的綠色熒光信號呈顆粒狀分布

5、于細胞質(zhì)，形成了包涵體；
　　2.與GFP-N1組和GFP-TDP-43組相比，GFP-TDP-25組細胞中蛋白Beclin-1表達上調(diào)，LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；
　　3.與未加入3-MA組相比，加入3-MA后，過表達TDP-25細胞的細胞活力降低、細胞凋亡率增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　截短型片段TDP-25能夠在細胞中形成包涵體，過表