Cereblon在慢性骨髓增殖性腫瘤中表達的臨床意義.pdf

1、目的:慢性骨髓增殖性腫瘤(cMPN)是一類造血干細胞起源的骨髓克隆性疾病，是一種惡性血液系統(tǒng)疾病。2008年，WHO論述的cMPN詳細列表中包括慢性粒細胞白血病(CML)、原發(fā)性骨髓纖維化(PMF)、真性紅細胞增多癥(PV)、原發(fā)性血小板增多癥(ET)、慢性中性粒細胞白血病(CNL)、慢性嗜酸性粒細胞白血病/高嗜酸性粒細胞綜合征（CEL/HES）、肥大細胞病(MCD)以及未分類型MPN(cMPN-U)。而PV、ET和PMF患者中存在JA

2、K2基因V617F突變，此類疾病主要特點是骨髓一系或多系的髓細胞過度增殖而導致外周血中粒細胞、紅細胞及血小板的增多。共同臨床表現為血栓形成及出血、脾臟腫大、可轉化為髓系白血病，PV、ET患者亦有骨髓纖維化的傾向。免疫調節(jié)藥物(IMiDs)是多種惡性疾病治療方案的重要組成部分[1]，沙利度胺為IMiDs的代表性藥物，早期研究認為其誘導的氧化應激及抗血管生成可能是致畸作用的機制[2，3]。近年來一項具有里程碑意義的研究發(fā)現cereblon(

3、CRBN)為沙利度胺致畸作用的重要靶點[4]。
　　E3蛋白酶復合體由CRBN、DDB1、ROC1、CUL4等構成，為一種泛素化連接酶。此復合物在體內能夠調節(jié)DNA的復制、修復和轉錄[5、6、7]。CRBN為E3蛋白酶復合體的相關因子，其在體內外均能發(fā)生泛素化作用[4]。有研究表明，沙利度胺的致畸作用是通過阻斷CRBN的泛素化實現的[8]，當沙利度胺或者來那度胺發(fā)揮作用時，CRBN就不能形成E3復合物。沙利度胺及一些類似藥物，如來

4、那度胺和帕米磷酸鹽類藥物被廣泛應用于慢性骨髓增殖性腫瘤、多發(fā)性骨髓瘤及骨髓增生異常綜合征等惡性疾病的治療中[9]。有關于多發(fā)性骨髓瘤(MM)的研究表明CRBN為免疫調節(jié)藥物治療所必須，CRBN表達水平低的MM患者原發(fā)抗來那度胺[8、10]。且患者對沙利度胺維持治療的反應與CRBN表達水平呈正相關性[11、121。然而目前有關CRBN的表達對于免疫調節(jié)劑治療慢性骨髓增殖性腫瘤的研究尚少。本實驗通過檢測慢性骨髓增殖性腫瘤(PMF、PV、ET

5、)患者骨髓液單個核細胞(BM-MNCs)中CRBN mRNA表達水平，及外周血MNCs中CRBN蛋白表達水平，分析CRBN與慢性骨髓增殖性腫瘤與沙利度胺臨床療效的關系。
　　方法:本實驗收集了河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院首診cMPNs患者的骨髓液24例（其中MF5例、PV7例、ET12例），以及外周血7例（其中MF2例、PV2例、ET3例）設為初治組。經口服沙利度胺50mg/d治療后的cMPNs患者的外周血11例設為治療組，其中連續(xù)口服6

6、個月以內者為3例，6個月至12個月4例，口服時間超過12個月4例，并收集10例血液系統(tǒng)非惡性疾病患者骨髓液及外周血設為對照組。通過應用實時熒光定量PCR及Western Blot的方法，檢測骨髓液單個核細胞(BM-MNCs)中cereblonmRNA、外周血MNCs中cereblon蛋白的表達水平。
　　結果:
　　1、cereblon mRNA的表達情況
　　RT-PCR結果顯示:初治組的24例cMPN患者單個核細胞

7、中CRBNmRNA的相對表達量為（1.0333±0.2723），其中初治MF、PV、ET患者CRBN mRNA的相對表達量分別為（1.1814±0.2257）、（0.9943±0.3377）、（0.9943±0.2484），對照組CRBN mRNA的相對表達量為（0.5699±0.9474）（見Fig.1、Tabel1）。所有cMPN患者的CRBN mRNA的相對表達水平均升高，24例患者總表達量、MF患者表達量、PV患者表達量及ET患

8、者表達量與對照組相比均具有統(tǒng)計學意義（P=0.000）;初治MF患者與初治PV患者CRBN mRNA的相對表達量相比無統(tǒng)計學差異(P=0.183)，初治MF患者與初治ET患者CRBN mRNA的相對表達量相比無統(tǒng)計學差異（P=0.144），初治PV患者與初治ET患者CRBN mRNA的相對表達量相比無統(tǒng)計學差異（P=0.100）（見Tabel1）;初治組24例患者中JAK2V617F突變陽性13例，突變陰性11例， JAK2V617F突

9、變陽性患者的CRBN mRNA相對表達量為（0.9743±0.2912），陰性為（1.1031±0.2427），兩組相比無統(tǒng)計學差異(P=0.259)，兩組與對照組相比具有統(tǒng)計學意義（P=0.000）（見Fig.2、Tabel2）。
　　2、cereblon蛋白表達情況
　　Western Blot結果顯示:初治組7例、治療組11例、對照組10例的cereblon蛋白表達量分別為（1.550±0.223）pg/ml、（1.0

10、28±0.182）pg/ml、（0.911±0.161）pg/ml（見Fig.3、Tabel3）。其中治療組中口服沙利度胺50mg/d連續(xù)6個月以內者、6個月至12個月者，及大于12個月者的CRBN蛋白表達量分別為（1.181±0.133）pg/ml、（0.996±0.571）pg/ml、（0.945±0.248）pg/ml，隨著持續(xù)口服沙利度胺時間的增長，CRBN蛋白表達量呈下降趨勢（見Fig.4、Tabel4）。所有cMPN患者CR

11、BN蛋白的表達量均升高，初治組與治療組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.000)，初治組與對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.000)，治療組CRBN蛋白的表達水平較對照組有升高趨勢，但其差異不具有統(tǒng)計學意義(P=0.160)（見Tabel3）。將未服用沙利度胺治療的初治組患者7例設為1組，持續(xù)口服沙利度胺50mg/d治療6個月以內的患者3例設為2組，持續(xù)治療6-12個月的患者4例設為3組，持續(xù)治療時間超過12個月的患者4例設為4組，正

12、常對照組10例設為5組，則1-5組的cereblon蛋白表達量分別為（1.550±0.223）pg/ml、（1.181±0.133）pg/ml、（0.996±0.571）pg/ml、（0.945±0.248）pg/ml、（0.911±0.161）pg/ml，各組之間CRBN蛋白的表達量呈下降趨勢，其中1組與2組相比差異具有統(tǒng)計學差異(P=0.007);與3、4、5組相比差異亦具有統(tǒng)計學意義(P=0.000)，2組與3、4組相比差異不具有

13、統(tǒng)計學意義(P=0.197、P=0.104)，與5組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P=0.034);3組與4、5組相比均不具有統(tǒng)計學差異（P=0.697、P=0.435）;4、5組間相比差異不具有統(tǒng)計學意義（P=0.749）(見Tabel4)。
　　3、cereblon mRNA與cereblon蛋白表達的相關性
　　初治組中7例患者的cereblon mRNA的相對表達量分別為1.0000、1.1617、0.5428、1.132

14、7、1.1759、1.4321、0.8564，cereblon蛋白的表達水平分別為1.566 pg/ml、1.431 pg/ml、1.164 pg/ml、1.632 pg/ml、1.732pg/ml、1.849 pg/ml、1.479 pg/ml。Cereblon mRNA表達與cereblon蛋白表達呈正相關性，相關系數為0.714，具有統(tǒng)計學意義(P=0.024)（見Fig.5）。
　　結論:
　　1、新診斷的慢性骨髓增