DETC在皮膚移植免疫排斥反應中作用及機制的初步研究.pdf

1、目的：如何延長異體皮膚移植物存活時間是燒傷創(chuàng)面修復領(lǐng)域中的主要問題。而作為皮膚中抗原性最強的表皮組織是引發(fā)皮膚移植排斥反應的關(guān)鍵部位。表皮組織主要由角盶細胞、郎格罕細胞(Langerhans cells，LCs)和樹突狀表皮內(nèi)T淋巴細胞(dentriticepidermal T lymohocytes,DETC)構(gòu)成。
　　傳統(tǒng)觀點認為LCs是引發(fā)異體皮膚移植免疫排斥反應的核心因素。但有觀點認為LCs擁有免疫調(diào)節(jié)功能，而非普遍認為

2、的強烈的免疫激活功能。通過LC敲除小鼠皮膚移植模型研究表明:與供受體都是野生型小鼠的皮膚移植相比，供體、受體以及供受體都缺乏LCs的小鼠之間的皮膚移植免疫排斥反應的發(fā)生時間并沒有延長;說明單純依靠LCs并不能直接引發(fā)皮膚移植免疫排斥反應。提示我們除LCs外，在皮膚移植免疫排斥反應中還可能存在其他的關(guān)鍵細胞參與。另外一種構(gòu)成表皮組織免疫微環(huán)境的重要細胞是DETC，即γδT細胞。γδT細胞優(yōu)先于αβT細胞出現(xiàn)，主要分布于小腸、肺、生殖器官及

3、皮膚等黏膜及皮下組，抗原識別無MHC限制性，其受體缺乏多樣性，只能識別共同抗原，γδT細胞識別抗原分子后，增殖分化為細胞毒性T細胞發(fā)揮生物學功能。γδT細胞被認為是機體免疫體系的“初級防線”。有研究表明DETC具有促進皮膚移植排斥反應的發(fā)生的作用。并且人類和小鼠外周血中的γδT細胞在激活后可同時表達高水平的共刺激分子如CD80/CD86等和MHCⅡ類分子，并有效地處理并遞呈多肽抗原直接激活na(i)ve CD4+T細胞，表現(xiàn)出專職抗原遞

4、呈細胞的特性。而我們實驗室前期的研究則表明外周循環(huán)中的γδT細胞以及皮膚組織中的DETC在激活后自發(fā)性高表達IFN-γ而不表達TGF-β。又有文獻表明異基因皮膚移植后供體DETC能夠通過淋巴引流進入淋巴結(jié)，參與naive CD4+T細胞的激活分化過程。與αβT細胞不同，γδT細胞不需要專職抗原遞呈細胞(APCs)輔助，該細胞就能夠通過膜表面TCRγδ分子直接識別應激性抗原、磷酸化抗原以及熱激蛋白的同源分子等多種形式的抗原，并被這些抗原激

5、活而分泌大量的IL2、TNFa，IFNγ等免疫激活因子。
　　以上信息提示我們DETC也具有類似LC的功能，可直接啟動皮膚移植排斥反應。我們主要擬議通過MHC微小差異型皮膚移植模型及na(i)ve CD4+T細胞分化實驗及抗體中和小鼠體內(nèi)IFN-γ后皮膚移植模型來初步研究DETC在皮膚移植免疫排斥反應中的作用及機制。
　　內(nèi)容及方法：
　　1.建立同系MHC分子微小差異的不同性別C57 BL/6小鼠（雄-雌）之間的皮膚

6、移植，比較野生型(WT)組與基因敲除(GK)組移植皮片存活時間。
　　2.免疫熒光及流式細胞技術(shù)鑒定小鼠DETCs細胞表型、形態(tài)學特征及細胞表達情況。
　　3.通過na(i)ve CD4+T細胞分化實驗及DETCs和na(i)ve CD4+T細胞進行共培養(yǎng)，觀察DETCs對淋巴細胞分化方向的影響。
　　4.建立小鼠皮膚移植模型，比較γ干擾素中和(IN)組與同行對照(C)組和GK組移植皮片存活時間。
　　5.通過C

7、onA對新鮮分離小鼠表皮細胞刺激與否，比較刺激組與對照組DETC表達IFN-γ情況。
　　結(jié)果：
　　1.基因敲除組小鼠移植皮片存活時間為22～35 d，較野生型組的12～16 d明顯延長(x2=14.1，P＜0.01)。
　　2.小鼠表皮細胞中DETCs陽性表達率為7.27％。且DETCs均為CD3+表型細胞，呈樹突狀散在分布在皮膚表皮中。
　　3.DETCs體外與na(i)ve CD4+T細胞共培養(yǎng)可以誘導該

8、型T細胞向Th1方向分化。
　　4.IFN-γ中和組小鼠移植皮片存活時間為19～24d，較同型對照組的12～16 d明顯延長(x2=13.6，P＜0.001)，但與基因敲除組小鼠移植皮片存活時間無差異(x2=0.06，P=0.81)。
　　5.刺激組與對照組小鼠表皮細胞中DETC IFN-γ表達率分別為22.7％和0.51％。
　　結(jié)論：
　　DETC在C57BL/6小鼠MHC分子微小差異的不同性別小鼠（雄-雌）