小鼠口腔癌模型骨髓播散細(xì)胞RB1CC1基因純合性缺失的初步研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:(1)初步探討小鼠口腔癌模型骨髓單個(gè)播散細(xì)胞基因組的檢測(cè)方法。(2)初步探討小鼠口腔癌模型舌重度異常增生時(shí)期骨髓播散細(xì)胞RB1CC1基因純合性缺失及其意義。
  方法:(1)4NQO飲水法建立小鼠口腔癌淋巴道轉(zhuǎn)移模型。定期處死小鼠,收集雙側(cè)股骨,F(xiàn)icoll密度梯度離心法提取骨髓單個(gè)核細(xì)胞層的細(xì)胞,并制作細(xì)胞涂片。以細(xì)胞角蛋白(CK)多克隆抗體為一抗免疫組化染色細(xì)胞涂片。小鼠的舌部進(jìn)行常規(guī)HE染色檢測(cè)。(2)收集35只小鼠口

2、腔癌模型舌重度異常增生時(shí)期骨髓單個(gè)核細(xì)胞涂片,激光捕獲顯微切割技術(shù)(LCM)捕獲細(xì)胞涂片上的單個(gè)CK陽(yáng)性(CK+)細(xì)胞。(3)單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增技術(shù)(WGA)擴(kuò)增單個(gè)細(xì)胞的DNA。(4)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)其視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤誘導(dǎo)卷曲蛋白(RB1CC1)基因的第二、第六和第七外顯子純合性缺失情況,并與舌部正常,重度異常增生以及鱗癌組織各4例對(duì)照。
  結(jié)果:(1)LCM切割46個(gè)CK+細(xì)胞,成功從35只小鼠骨髓涂片各捕獲1個(gè)CK

3、+細(xì)胞,總共35個(gè)細(xì)胞,成功率76%。(2)擴(kuò)增CK+細(xì)胞35個(gè),單細(xì)胞WGA擴(kuò)增成功且PCR成功擴(kuò)增出內(nèi)參GAPDH的單細(xì)胞為3個(gè),成功率8.6%。(3)RB1CC1基因第二外顯子純合性缺失情況分別為單個(gè)CK+細(xì)胞(2/3),舌癌變組織(2/4),舌部正常組織(0/4),重度異常增生組織(0/4);RB1CC1基因第六外顯子純合性缺失情況分別為單個(gè)CK+細(xì)胞(0/3),舌癌變組織(0/4),舌部正常組織(0/4),重度異常增生組織(0

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