低頻低能量超聲聯(lián)合微泡對(duì)人前列腺細(xì)胞形態(tài)、彈性模量及生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：觀察低頻低能量超聲聯(lián)合微泡作用后，人前列腺癌細(xì)胞DU145、PC-3及正常前列腺上皮細(xì)胞RWPE-1的細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞彈性及生物學(xué)行為的改變。
　　方法：實(shí)驗(yàn)分3組：對(duì)照組、單純超聲組、超聲聯(lián)合微泡組。每種細(xì)胞的對(duì)照組均加入一定比例的生理鹽水，不進(jìn)行超聲輻照；單純超聲組加入等比例的生理鹽水后運(yùn)用超聲輻照；超聲聯(lián)合微泡組加入等比例的微泡造影劑懸濁液，運(yùn)用超聲輻照。輻照的超聲發(fā)射頻率為21KHz，間斷輻照2min，占空比30％（開

2、3s，停7s）。各組細(xì)胞在處理過后立即用原子力顯微鏡觀察其形貌并計(jì)算其楊氏模量；同時(shí)，對(duì)同一處理方式的對(duì)照組及超聲聯(lián)合微泡組細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)24h，運(yùn)用CCK-8試劑盒及Transwell小室測其細(xì)胞增殖及遷移能力并用透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)；運(yùn)用western blot方法檢測同一處理方式的對(duì)照組及超聲聯(lián)合微泡組細(xì)胞的LC3蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：
　　1．單純超聲組的DU145細(xì)胞、PC-3細(xì)胞及RWPE-1細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)與

3、對(duì)照組無明顯變化；低頻超聲聯(lián)合微泡組的三種細(xì)胞胞膜表面可見孔狀結(jié)構(gòu)，PC-3細(xì)胞及DU145細(xì)胞細(xì)胞膜完整性遭到破壞，與對(duì)照組相比三種細(xì)胞的彈性模量均變大，PC-3細(xì)胞尤甚。
　　2．CCK-8檢測細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與對(duì)照組細(xì)胞相比，PC-3細(xì)胞的超聲聯(lián)合微泡組細(xì)胞增殖能力減低（P=0.022），而DU145細(xì)胞及RWPE-1細(xì)胞超聲聯(lián)合微泡組細(xì)胞增殖能力無明顯變化。運(yùn)用Transwell小室的遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，

4、低頻超聲聯(lián)合微泡組的兩種前列腺癌細(xì)胞DU145及PC-3的遷移能力減低（P=0.015，P=0.017）。透射電鏡觀察結(jié)果示：對(duì)照組的三種細(xì)胞個(gè)別細(xì)胞內(nèi)可見自噬體或自噬溶酶體，而超聲聯(lián)合微泡組三種細(xì)胞內(nèi)均見約20%細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)多個(gè)自噬泡及自噬溶酶體。Western Blot檢測各組細(xì)胞LC3蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示DU145細(xì)胞、PC-3細(xì)胞、RWPE-1細(xì)胞的超聲聯(lián)合微泡組細(xì)胞的LC3II的量都較對(duì)照組增加(對(duì)照組 LC3II/超聲聯(lián)合微泡

5、組 LC3II分別為156%，138%，244%)。
　　結(jié)論：
　　1．本研究條件下低頻低能量超聲聯(lián)合微泡可引起前列腺癌DU145細(xì)胞、PC-3細(xì)胞及正常前列腺上皮RWPE-1細(xì)胞細(xì)胞膜出現(xiàn)孔狀結(jié)構(gòu)，破壞DU145細(xì)胞及PC-3細(xì)胞細(xì)胞膜的完整性，致細(xì)胞彈性模量增高。
　　2．本研究條件下低頻低能量超聲聯(lián)合微泡抑制前列腺癌PC-3細(xì)胞的增殖及DU145細(xì)胞的PC-3細(xì)胞的遷移。
　　3．本研究條件下的低頻低能量