補腎方對埋植孕激素去勢小鼠孕激素及子宮內膜的影響研究.pdf

1、近年來，在制劑、臨床領域對于緩控釋制劑藥物的研究較為活躍，并逐漸成為國內外醫(yī)藥工業(yè)發(fā)展的重要方向之一。埋植劑作為緩控釋制劑的一個重要組成部分，因其具有使藥物生物活性增強、作用時間延長、生物利用度高等特點，發(fā)展及應用范圍越來越廣泛。
　　埋植劑作為控制藥物緩慢釋放體系，其目的是為了減小藥物副作用，保持穩(wěn)定的血藥濃度，從而達到藥物在體內的最佳療效而設計。本實驗研究的對象為孕激素埋植劑，主要是通過觀察埋植劑在體外、去勢小鼠體內的實驗研究

2、，驗證埋植劑釋放度的穩(wěn)定性，為課題研究提供必要的基礎實驗數(shù)據(jù)。孕激素埋植劑目前廣泛應用于計劃生育領域，其臨床最常見的副作用為子宮內膜的異常變化，導致出血和月經(jīng)紊亂，嚴重影響了婦女使用埋植劑避孕過程中的生活質量，現(xiàn)階段尚無有效的藥物。而中醫(yī)認為腎為先天之本，腎“藏精，主生殖”，是人體生命活動的根源。本實驗通過給予去勢小鼠應用補腎方，觀察中藥補腎方對應用埋植劑去勢小鼠孕激素含量以及子宮內膜的改變，探討補腎方對埋植孕激素去勢小鼠的影響，以期為

3、臨床應用補腎中藥改善或治療子宮內膜變化性疾病奠定科學數(shù)據(jù)。
　　第一部分埋植劑孕激素管的穩(wěn)定性研究
　　目的:研究孕激素皮下埋植劑在體外與去勢小鼠體內的釋放度，評價本埋植劑藥物釋放的均勻性與穩(wěn)定性。
　　方法:
　　1、自制孕激素管埋植劑。
　　2、體外研究用紫外分光光度法測定藥物的含量，研究藥物的體外釋放度。
　　3、體內研究選用清潔級KM雌性小鼠，試養(yǎng)1周后將小鼠的雙側卵巢摘除，恢復1周后將孕激素

4、管埋植劑埋入小鼠的頸部皮膚松弛處皮下，后分別在96h(96h×1)、192h(96h×2)、288h(96h×3)取出，并用電子分析天平測其失重，計算藥物的體內釋放度。
　　結果:
　　1、體外實驗顯示:體外96h(96h×1)、192h(96h×2)、288h(96h×3)釋放液的吸光值平均范圍分別為:0.52-0.79;0.53-0.76;0.53-0.78。
　　2、體內實驗顯示孕激素釋放量:①體內96h(96h

5、×1)時分別為1.12mg，1.08mg，1.13mg，1.06mg，1.14mg;②體內192h(96h×2)時分別為1.89mg，1.93mg，2.02mg，2.00mg，1.96mg;③體內288h(96h×3)時分別為2.72mg，2.81mg,2.79mg,2.90mg,2.86mg。
　　結論:
　　1、體外實驗表明，孕酮埋植劑在96h(96h×1)、192h(96h×2)、288h(96h×3)時，藥物釋放的吸

6、光度值保持恒定，表明孕酮埋植劑釋放度均勻穩(wěn)定。
　　2、孕酮埋植劑在96h(96h×1)、192h(96h×2)、288h(96h×3)內，體內釋放平均速率基本相同，表明孕酮埋植劑具有恒定的藥物釋放速率，符合零級釋放。
　　3、該孕酮埋植劑管釋放穩(wěn)定，可用于動物實驗中孕酮持續(xù)恒定的給藥設計。
　　第二部分補腎方對去勢小鼠子宮內膜的影響研究
　　目的:通過觀察補腎方對埋植孕激素去勢小鼠出血模型的干預，研究補腎方對持

7、續(xù)96h(96h×1)、192h(96h×2)、288h(96h×3)埋植孕激素去勢小鼠血清中孕激素含量及子宮內膜的影響。
　　方法:
　　1、去勢小鼠出血模型的建立:選用清潔級KM雌性小鼠，試養(yǎng)1周后，隨機分為正常組、模型組、補腎組。將小鼠雙側卵巢摘除，恢復1周以清除體內激素的干擾。正常組小鼠給予水、飼料飼養(yǎng);模型組與對照組小鼠埋入皮埋劑，后于每天上午8-9點時給予補腎組小鼠灌胃補腎方藥液20g/(kg·d)，給予模型組小

8、鼠灌胃等量生理鹽水。
　　2、三組小鼠分別在埋植孕激素的96h(96h×1)、192h(96h×2)、288h(96h×3)時，將小鼠處死，取血，分離血清，應用放射免疫法檢測孕激素的含量。
　　3、與此同時，摘取上述各組小鼠的子宮，觀察小鼠子宮形態(tài)學的變化，進行拍照并稱重，計算子宮系數(shù);制作子宮切片，于顯微鏡下觀察其結構并拍照。
　　結果:
　　1、去勢小鼠血清中孕激素含量的變化
　　正常組小鼠血清中孕激素

9、含量在96h(96h×1)為0.82±0.92pg/mL，192h(96h×2)為0.79±0.93pg/mL，288h(96h×3)為0.80±0.95pg/mL，隨時間變化孕激素含量無明顯變化;模型組小鼠血清中孕激素含量在96h(96h×1)為21.10±0.90pg/mL，192h(96h×2)為35.23±1.32pg/mL，288h(96h×3)為45.51±1.03pg/mL，與正常組相比呈現(xiàn)隨時間上升的趨勢(P＜0.05）

10、;補腎組小鼠血清中孕激素含量96h(96h×1)為18.22±0.97pg/mL，192h(96h×2)為16.93±1.21pg/mL，288h(96h×3)h為14.69±0.93pg/mL，與模型組相比，除96h無明顯變化外，其余兩組均明顯降低（P＜0.05）。
　　2、小鼠子宮內膜的變化
　　2.1子宮形態(tài)學的觀察
　　正常組小鼠子宮角通體為乳白色，兩側大小均勻，隨時間延長無明顯的變化。模型組小鼠子宮角在96h

11、稍有腫脹，顏色呈淺粉色;192h腫脹與96h變化不大，顏色呈淡粉紅;288h時腫脹較為明顯，外被覆毛細血管。補腎組小鼠子宮角在96h稍有腫脹，內有液體充盈，顏色呈現(xiàn)淡粉色;192h子宮增大，毛細血管漸豐富，顏色呈現(xiàn)粉紅色;288h腫脹明顯，且可以看到大量的紅色毛細血管充盈。
　　2.2去勢小鼠子宮指數(shù)的變化
　　正常組小鼠子宮指數(shù)在96h(96h×1)為0.16±0.04g/g，192h(96h×2)為0.15±0.04 g

12、/g，288h(96h×3)為0.16±0.03 g/g，隨時間變化子宮指數(shù)無明顯變化;模型組小鼠子宮指數(shù)在96h(96h×1)為0.16±0.04 g/g，192h(96h×2)為0.21±0.05 g/g，288h(96h×3)為0.26±0.04 g/g，與正常組相比，除96h無明顯變化外，其余兩組均明顯升高(P＜0.05）;補腎組小鼠子宮指數(shù)在96h(96h×1)為0.15±0.03 g/g，192h(96h×2)為0.22±0

13、.05g/g，288h(96h×3)為0.19±0.03 g/g，與模型組相比，96h與192h無明顯變化，288h子宮指數(shù)明顯降低(P＜0.05)。
　　2.3子宮內膜的組織形態(tài)學觀察
　　正常組小鼠子宮內膜間質致密，為單層柱狀上皮，核質較高，細胞核呈橢圓狀。模型組小鼠子宮內膜在96h內膜變厚，間質中腺體數(shù)量增多，螺旋小動脈逐漸發(fā)育;192h比96h變化明顯，螺旋小動脈進一步增生;288h時內膜較厚，間質疏松，螺旋小動脈減