長葉紅砂抗壞血酸過氧化物酶基因的表達特性及功能分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、長葉紅砂（Reaumuria.trigyna）是我國特有珍稀植物，由于長葉紅砂對鹽漬化土地和荒漠環(huán)境有很好的適應性，因此在改良土壤鹽堿性、防風固沙等方面具有重要作用。植物抗壞血酸過氧化物酶(ascorbate peroxidase，APX)基因作為抗壞血酸-谷胱甘肽循環(huán)中的關鍵酶，其主要功能是利用抗壞血酸為特殊的電子供體并催化H2O2轉變?yōu)镠2O，從而清除細胞內多余的H2O2。通過對長葉紅砂APX基因的研究有助于了解其在抗逆生長中發(fā)揮的

2、作用。本研究從長葉紅砂轉錄組高通量測序數(shù)據(jù)庫中篩選獲得了長葉紅砂的抗壞血酸過氧化物酶基因，命名為RtAPX1。并對該基因進行了表達特性及功能分析，結果如下:
　　1.通過NCBI的ORF Finder在線分析獲得RtAPX1的開放閱讀框(OpenReading Frame，ORF)序列及氨基酸序列，生物信息學分析結果顯示RtAPX1編碼區(qū)序列長861bp，編碼一個含286個氨基酸的蛋白質，預測分子量31.29 kilodalton

3、s，等電點6.61。Protscale軟件分析編碼蛋白的親疏水性，結果顯示該蛋白屬于親水性蛋白。SOPMA軟件分析編碼蛋白的二級結構，結果顯示該蛋白存在的二級結構主要為α螺旋和無規(guī)則卷曲。使用Mega6.0構建系統(tǒng)進化樹，結果顯示長葉紅砂RtAPX1編碼的蛋白與檉柳的APX蛋白同源性最高。
　　2.Real-time PCR分析結果顯示，RtAPX1在200mM、400mM、600mMNaCl、干旱脅迫以及冷脅迫處理后表達量明顯升

4、高，其中當脅迫處理時間達到12小時后其表達量達到最高。構建了pUC18-RtAPX1亞細胞定位載體，亞細胞定位結果顯示，RtAPX1編碼蛋白定位于細胞質當中，RtAPX1屬于cytosolic APX(cAPX)。
　　3.構建了pPICZα-RtAPX1酵母表達載體。將pPICZα-RtAPX1轉化到酵母中，結果顯示:RtAPX1的過量表達提高了轉化酵母對NaCl、干旱、低溫和紫外脅迫的耐受性。
　　以上研究結果表明，Rt

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