中國(guó)擬青霉(Paecilomyces sinensis)菌絲體糖肽的分離純化及活性研究.pdf

1、冬蟲(chóng)夏草是我國(guó)的傳統(tǒng)中藥，中國(guó)擬青霉(Paecilomyces sinensis)是冬蟲(chóng)夏草中分離的一個(gè)無(wú)性型菌株，并且中國(guó)擬青霉在形態(tài)學(xué)、藥理學(xué)及化學(xué)成分方面與天然冬蟲(chóng)夏草非常相似。本研究從中國(guó)擬青霉中分離出了具有生物活性的大分子均一糖肽，并對(duì)其結(jié)構(gòu)、生物活性進(jìn)行了研究。
　　本課題采用液體發(fā)酵法得到中國(guó)擬青霉菌絲體，干燥后的菌絲體通過(guò)水提醇沉法提取，分離除蛋白后得到分子量均一的糖肽粗品CPS-Ⅰ，其糖含量為71.3％。凱氏定氮

2、法檢測(cè)了CPS-Ⅰ蛋白質(zhì)含量為19.1％。CPS-Ⅰ通過(guò)葡聚糖凝膠分離純化之后得CPS-Ⅱ。通過(guò)高效液相色譜、核磁共振氫譜、炭譜、紅外光譜等分析檢測(cè)CPS-Ⅱ，檢測(cè)結(jié)果表明CPS-Ⅱ?yàn)橐环N大分子糖肽。通過(guò)旋光儀測(cè)得其比旋光度+35°，表明不對(duì)稱(chēng)性比較低。應(yīng)用高效液相色譜、氣相色譜、紅外光譜和核磁共振、高碘酸氧化和Smith降解、甲基化等方法測(cè)定CPS-Ⅱ一級(jí)結(jié)構(gòu)，結(jié)果表明CPS-Ⅱ主要以1→3、1→4連接葡萄糖和半乳糖為主鏈，還有1→2

3、，3，6連接葡萄糖，1→3，6連接甘露糖，1→6連接半乳糖。圓二色譜法分析糖肽構(gòu)象得出:中國(guó)擬青霉菌絲體糖肽能與剛果紅發(fā)生絡(luò)合，是具有(+) cotton效應(yīng)的α-螺旋結(jié)構(gòu)，含有較多的螺旋、轉(zhuǎn)角結(jié)構(gòu)。
　　采用MTT法評(píng)價(jià)了CPS-Ⅱ細(xì)胞抗腫瘤活性，應(yīng)用DPPH法和Fenton法檢測(cè)了CPS-Ⅱ的抗氧化性。結(jié)果表明CPS-Ⅱ?qū)epG2細(xì)胞的半抑制濃度(IC50)為526μg/mL;CPS-Ⅱ清除DPPH·的能力為18.2％，CP