阿魏酸對腦微血管內(nèi)皮細胞氧化損傷的保護作用.pdf

1、目的:
　　本實驗主要在細胞水平上，運用體外構(gòu)建模擬血管性癡呆的糖氧剝奪(oxygen-glucose deprivation，OGD)的腦微血管內(nèi)皮細胞(brain mierovascularendothelial cells，BMECs)模型，并在在不同時間點（2，4，6小時）研究阿魏酸(Ferulic acid，F(xiàn)A)對這個模型所致的細胞氧化損傷的保護作用。
　　方法:
　　通過在細胞水平上，運用（95％氮氣+5

2、％二氧化碳）混合氣體的方法，模型缺氧缺糖的細胞環(huán)境，建立體外OGD模型。按照實驗?zāi)康慕⒎纸M，正常組，模型組，阿魏酸組（FA組）。首先運用MTT法檢測細胞活性，待模型組的細胞活性對比正常組有顯著性差異，提示細胞造模成功后，在不同時間段造模的細胞模型給予阿魏酸進行預(yù)保護，探究阿魏酸的保護氧化損傷的細胞的作用。運用流式細胞術(shù)檢測技術(shù)，研究和檢測活性氧(reactive oxygen species，ROS)產(chǎn)生量，ROS的過度累計會損傷細胞

3、的提示細胞的氧化損傷的程度，檢測ROS的產(chǎn)量直接反應(yīng)了細胞上的氧化損傷的水平。運用硫代巴比妥酸顯色法，研究和檢測細胞丙二醛(methane dicarboxylicaldehyde，MDA)水平，MDA是膜脂氧化的重要產(chǎn)物之一，MDA的水平也提示著細胞氧化損傷的水平。運用氮藍四唑顯色法，研究和檢測細胞總超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)活性。SOD是廣泛存在于動植物中的一種重要的抗氧化酶，SOD的活性提示著

4、細胞的抗氧化能力。
　　結(jié)果:
　　體外糖氧剝奪模型對腦微血管內(nèi)皮細胞造成的氧化損傷嚴(yán)重性呈時間依賴性，并在一定時間內(nèi)(2，4，6h)損傷程度隨時間遞增。模型組隨著OGD的時間的增加(2，4，6h)細胞活性不斷降低，提示造模的成功，阿魏酸能顯著增強被損傷的細胞存活性。在流式細胞術(shù)檢測的模型組的ROS的產(chǎn)量隨著時間的增加而增加，而給藥阿魏酸后可以顯著減少ROS的產(chǎn)量，提示阿魏酸的抗氧化作用。同時，給藥阿魏酸后明顯削減細胞內(nèi)MD