降脂通絡軟膠囊對膜性腎病大鼠的腎保護作用及對腎組織α-actinin-4、ZO-1表達的影響.pdf

1、目的：運用陽離子化牛血清白蛋白（ cationic bovine serum albumin， C-BSA）尾靜脈注射的方法成功復制膜性腎?。?membranous nephropathy，MN）大鼠模型，并給予降脂通絡軟膠囊、鹽酸貝那普利進行干預，通過測定大鼠24小時尿蛋白定量、血生化指標，光鏡、免疫熒光、電鏡觀測大鼠腎臟病理變化，免疫組化檢測α-actinin-4、ZO-1蛋白及real-time PCR法檢測α-actinin-4

2、、ZO-1 mRNA在腎臟中的表達，來探討降脂通絡軟膠囊對膜性腎病大鼠的腎保護作用及對腎組織α-actinin-4、ZO-1表達的影響，從而為臨床治療膜性腎病提供理論依據。
　　方法：選取健康SD大鼠60只，普通飼料喂養(yǎng)一周后，測定24小時尿蛋白定量均在正常范圍內，隨機分為正常組（ZG）10只，造模組50只。造模組預免疫1周后，尾靜脈注射陽離子化牛血清白蛋白，每周三次，共四周。測定24小時尿蛋白定量，確定模型復制成功后，隨機分為模

3、型組（MG）、西藥組（BG）、降脂通絡低劑量組（JLG）、降脂通絡中劑量組（JMG）、降脂通絡高劑量組（JHG），每組各10只。西藥組給予鹽酸貝那普利（10mg/kg/d）研磨溶于3ml生理鹽水灌胃，降脂通絡低、中、高劑量組分別給予降脂通絡軟膠囊（25mg/kg/d、50mg/kg/d、100mg/kg/d）溶于3ml生理鹽水灌胃，模型組和正常組給予同等劑量的生理鹽水灌胃。灌胃4周后，測定各組大鼠24小時尿蛋白定量（24-hour ur

4、inary total protein，UTP），腹主動脈取血，測定血總蛋白（serum total protein，TP）、血白蛋白（albumin，ALB）、血總膽固醇（total cholesterol，TC）、血甘油三酯（triglyceride，TG）、血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）、血肌酐（serum creatinine，Scr）等生化指標，留取新鮮腎臟組織，通過光鏡、免疫熒光、電鏡觀測大鼠腎臟

5、病理變化，免疫組化檢測α-actinin-4、ZO-1蛋白及real-time PCR法檢測α-actinin-4、ZO-1 mRNA在腎臟中的表達。
　　結果：⑴正常組大鼠毛發(fā)光澤、精神良好、反應靈敏。模型復制成功后，各造模組大鼠出現毛發(fā)欠光澤、精神萎靡、反應遲鈍、攝食減少等，甚至出現陰囊水腫、腹部腫脹。給藥后，各治療組大鼠較模型組情況好轉，模型組未見明顯改善。⑵24小時尿蛋白定量，模型復制成功后，各造模組均較正常組明顯升高，差

6、異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。灌胃4周后，各治療組較模型組顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；降脂通絡低劑量組與其他治療組比較明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；西藥對照組、降脂通絡中劑量組、降脂通絡高劑量組比較，未見明顯差異（P>0.05）。⑶模型復制成功后，各造模組血總蛋白和血白蛋白均較正常組明顯降低、血總膽固醇和血甘油三酯均較正常組明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。灌胃4周后，各治療組血總蛋白和血白蛋白

7、較模型組顯著升高、血總膽固醇和血甘油三酯較模型組顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；降脂通絡低劑量組與其他治療組比較，血總蛋白和血白蛋白明顯降低、血總膽固醇和血甘油三酯明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；西藥對照組、降脂通絡中劑量組、降脂通絡高劑量組兩兩比較，血總蛋白、血白蛋白、血總膽固醇、血甘油三酯均未見明顯差異（P>0.05）。⑷各組大鼠之間血肌酐、血尿素氮相比無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。⑸正常組大

8、鼠無明顯的改變。模型組大鼠光鏡下腎小球體積、毛細血管內皮細胞核均明顯增大，腎小球基底膜呈彌漫性增厚，系膜基質增生；免疫熒光可見lgG和C3呈顆粒狀沿著毛細血管袢及系膜區(qū)彌漫性沉積；電鏡下腎小球基底膜不規(guī)則增厚，上皮下大量電子致密物沉積，足突廣泛融合或消失，釘突形成。各治療組與模型組比較，病理改變輕微，其中降脂通絡低劑量組病理改變介于模型組與其他治療組之間，其他治療相比未見明顯差異。⑹α-actinin-4、ZO-1均主要表達于腎小球，沿

9、毛細血管袢呈點線狀分布，其中α-actinin-4在模型組較正常組表達增多，ZO-1模型組較正常組表達減少。各造模組與正常組相比，α-actinin-4的表達水平均增強、ZO-1的表達水平均減弱（P<0.05）；各治療組與模型組相比，α-actinin-4的表達水平均減弱、ZO-1的表達水平均增強（P<0.05）；降脂通絡低劑量組與其他治療組比較，α-actinin-4的表達水平均增強、ZO-1的表達水平均減弱（P<0.05）；西藥對照

10、組、降脂通絡中劑量組、降脂通絡高劑量組兩兩比較，α-actinin-4、ZO-1的表達水平未見明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。⑺各造模組與正常組相比，α-actinin-4 mRNA的表達水平均有上調， ZO-1 mRNA的表達水平均下調，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；各治療組與模型組相比，α-actinin-4 mRNA的表達水平均有下調，ZO-1 mRNA的表達水平均上調，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；降脂通絡低

11、劑量組與其他治療組比較，α-actinin-4 mRNA的表達水平均有上調，ZO-1 mRNA的表達水平均下調，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；西藥對照組、降脂通絡中劑量組、降脂通絡高劑量組兩兩比較，α-actinin-4 mRNA、ZO-1 mRNA的表達水平未見明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　結論：①降脂通絡軟膠囊可明顯升高膜性腎病大鼠的血總蛋白、血白蛋白水平，顯著降低膜性腎病大鼠的24小時尿蛋白定量、血總