輪狀病毒間接免疫熒光檢測方法的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目前，國內僅有的輪狀病毒疫苗是由蘭州生物制品研究所有限責任公司生產并于2000年注冊批準上市。此疫苗采用lgCCID50和ELISA聯(lián)合法（lgCCID50–ELISA）檢測輪狀病毒滴度，但試驗已證明采用該方法測定病毒滴度在時間花費和重復性方面有其不足。在本試驗中，我們建立了間接免疫熒光法（indirect immunofluoresce assay,IFA）檢測蘭州生物制品研究所有限責任公司生產的蘭州羔羊輪狀病毒疫苗的滴度，并對采取兩

2、種檢測方法所得出的結果進行比較。
　　本文重點對IFA法測定輪狀病毒中各條件進行優(yōu)化，其中包括MA104細胞最佳接入密度、稀釋輪狀病毒用胰酶的最適濃度和病毒感染MA104細胞的最佳時間等。結果表明：IFA法最佳工作條件為，MA104細胞密度2×104個/孔為最佳，稀釋病毒用胰酶濃度為1μg/ml，輪狀病毒最佳培養(yǎng)時間為18h，80％的丙酮作為固定液且固定時間為10min，兔抗SA11多克隆抗體為一抗的最適稀釋度和作用時間分別為1:

3、800、60min，Alexa-488標記的山羊抗兔抗體為二抗的最適稀釋度和作用時間分別為1:500、60min。通過以上條件的摸索，確立了輪狀病毒滴度的檢測方法。
　　將已知輪狀病毒滴度的樣品1×106FCFU/ml經倍比稀釋至10FCFU/ml，應用IFA法檢測各稀釋倍數(shù)的滴度，最后確定應用該方法測定病毒樣品的敏感性為10FCFU/ml；采用此IFA法測定經RV感染的MA104細胞在熒光顯微鏡下呈陽性，而檢測狂犬病毒、流感病毒

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