單核-巨噬細胞趨化因子CCL2對骨肉瘤增殖轉(zhuǎn)移及巨噬細胞極化的調(diào)控作用.pdf

1、骨肉瘤是一類嚴(yán)重危害青少年生命和健康的疾病，近20年其五年生存率未見提高，肺轉(zhuǎn)移是其致死的首要原因，一旦發(fā)生，其五年生存率將低于30％。因此，尋找有效控制骨肉瘤生長和轉(zhuǎn)移的治療靶點是骨肉瘤治療中亟需解決的問題之一。單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1，又名CCL2)的表達與骨肉瘤惡性行為相關(guān)。探索CCL2對骨肉瘤增殖轉(zhuǎn)移的作用，特別是肺轉(zhuǎn)移中的作用和機制，有助于為控制骨肉瘤進展提供新的治療策略。
　　目的:
　　(1)分析CCL

2、2在骨肉瘤中的表達情況，及其與肺轉(zhuǎn)移的相關(guān)性;
　　(2)探索CCL2對骨肉瘤增殖和轉(zhuǎn)移能力的調(diào)控作用及機制;
　　(3)CCL2對骨肉瘤極化巨噬細胞M1/M2表型的影響。
　　方法:
　　在不同肺轉(zhuǎn)移潛能的骨肉瘤細胞株、動物和臨床標(biāo)本上用RT-PCR、western-blot及免疫組化檢測CCL2的表達，分析其與骨肉瘤及其肺轉(zhuǎn)移的相關(guān)性;構(gòu)建CCL2穩(wěn)定干擾的骨肉瘤細胞株，采用CCK-8檢測增殖、劃痕檢測細胞遷

3、移、流式細胞儀檢測細胞周期和凋亡、Transwell檢測細胞侵襲改變等;同時將CCL2 RNA干擾的骨肉瘤細胞株及其對照組與巨噬細胞共培養(yǎng)，采用RT-PCR檢測M1、M2表型相關(guān)基因的表達情況。
　　結(jié)果:
　　CCL2在骨肉瘤細胞株及標(biāo)本中均有一定表達，其中肺轉(zhuǎn)移灶（高肺轉(zhuǎn)移性細胞株）表達高于原發(fā)灶（低肺轉(zhuǎn)移性細胞株）、高于對照（對照成骨細胞株）;CCL2 RNA干擾后細胞增殖減慢、遷移侵襲能力減弱;對FasL凋亡的敏感性