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文檔簡介
1、目的:
研究 PCBP2在大鼠坐骨神經損傷過程中的表達變化、作用,分析 PCBP2與雪旺細胞增殖之間的關系,探討 PCBP2在周圍神經損傷和修復過程中的作用機制,也為周圍神經損傷的治療提供依據(jù)。
方法:
1.選用健康成年雄性SD大鼠(220-275 g左右)54只,構建大鼠坐骨神經夾傷模型,根據(jù)損傷時間的不同,將大鼠隨機分為9組:正常組(假手術組)、6h、12h、1d、3d、5d、1w、2w和4w。每組6只
2、,其中3只用于組織切片,3只用于提取神經組織蛋白,運用Western Blot方法測定不同損傷時間點PCBP2的表達變化,初步確定PCBP2的表達在周圍神經損傷后的變化趨勢。
2.通過免疫組化的方法觀察 PCBP2在周圍神經損傷后相應組織中的表達情況,通過免疫熒光雙標方法分析 PCBP2在坐骨神經中的分布和細胞定位。
3.篩選PCBP2干擾的雪旺細胞穩(wěn)轉株,在穩(wěn)轉株中驗證干擾 PCBP2后是否會影響FHL3、p21信
3、號的表達。運用流式細胞技術及CCK-8分析干擾PCBP2后對雪旺細胞增殖周期的影響。
結果:
1. Western bolt結果顯示PCBP2蛋白水平在神經損傷后3d開始上調,在7d達到高峰,在損傷后4w恢復到正常水平。
2.免疫組化結果表明坐骨神經夾傷后,神經組織中的 PCBP2陽性率增強;免疫熒光雙標分析表明在坐骨神經夾傷后,PCBP2主要表達于 S100標記的雪旺細胞中,與 NF200標記的軸突沒有共
4、定位。此外,PCBP2與雪旺細胞增殖標記物PCNA也有共定位。
3. TNF-α誘導的雪旺細胞增殖模型中,PCBP2的表達逐漸增加,與細胞增殖標記物PCNA的表達趨勢一致,但FHL3及p21的表達逐漸降低。流式細胞分析技術及CCK-8結果表明:干預PCBP2的表達能抑制雪旺細胞的增殖。
4.雪旺細胞中干預PCBP2的表達后,F(xiàn)HL3及p21的表達增加,同時干預FHL3的表達后,p21的表達減少,并且免疫熒光雙標實驗表
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