PCBP2在大鼠坐骨神經損傷后的時空表達變化對雪旺細胞增殖的影響.pdf

1、目的：
　　研究 PCBP2在大鼠坐骨神經損傷過程中的表達變化、作用，分析 PCBP2與雪旺細胞增殖之間的關系，探討 PCBP2在周圍神經損傷和修復過程中的作用機制，也為周圍神經損傷的治療提供依據(jù)。
　　方法：
　　1.選用健康成年雄性SD大鼠（220-275 g左右）54只，構建大鼠坐骨神經夾傷模型，根據(jù)損傷時間的不同，將大鼠隨機分為9組：正常組（假手術組）、6h、12h、1d、3d、5d、1w、2w和4w。每組6只

2、，其中3只用于組織切片，3只用于提取神經組織蛋白，運用Western Blot方法測定不同損傷時間點PCBP2的表達變化，初步確定PCBP2的表達在周圍神經損傷后的變化趨勢。
　　2.通過免疫組化的方法觀察 PCBP2在周圍神經損傷后相應組織中的表達情況，通過免疫熒光雙標方法分析 PCBP2在坐骨神經中的分布和細胞定位。
　　3.篩選PCBP2干擾的雪旺細胞穩(wěn)轉株，在穩(wěn)轉株中驗證干擾 PCBP2后是否會影響FHL3、p21信

3、號的表達。運用流式細胞技術及CCK-8分析干擾PCBP2后對雪旺細胞增殖周期的影響。
　　結果：
　　1. Western bolt結果顯示PCBP2蛋白水平在神經損傷后3d開始上調，在7d達到高峰，在損傷后4w恢復到正常水平。
　　2.免疫組化結果表明坐骨神經夾傷后，神經組織中的 PCBP2陽性率增強；免疫熒光雙標分析表明在坐骨神經夾傷后，PCBP2主要表達于 S100標記的雪旺細胞中，與 NF200標記的軸突沒有共

4、定位。此外，PCBP2與雪旺細胞增殖標記物PCNA也有共定位。
　　3. TNF-α誘導的雪旺細胞增殖模型中，PCBP2的表達逐漸增加，與細胞增殖標記物PCNA的表達趨勢一致，但FHL3及p21的表達逐漸降低。流式細胞分析技術及CCK-8結果表明：干預PCBP2的表達能抑制雪旺細胞的增殖。
　　4．雪旺細胞中干預PCBP2的表達后，F(xiàn)HL3及p21的表達增加，同時干預FHL3的表達后，p21的表達減少，并且免疫熒光雙標實驗表