人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)小鼠皮膚創(chuàng)面愈合的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究hUC-MSCs局部移植對(duì)小鼠全層皮膚切除創(chuàng)面愈合的影響，為hUC-MSCs用于皮膚創(chuàng)面治療提供理論依據(jù)。
　　方法：采用組織塊貼壁法進(jìn)行hUC-MSCs的分離和培養(yǎng)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞免疫表型，并作誘導(dǎo)向成骨、成脂細(xì)胞方向分化。用CM-Dil對(duì) hUC-MSCs進(jìn)行體外標(biāo)記，觀察標(biāo)記后細(xì)胞生物學(xué)特征， MTT法檢測(cè)CM-Dil標(biāo)記后hUC-MSCs增殖能力的變化。采用BALB/c小鼠建立全層皮膚缺損創(chuàng)面模型，隨機(jī)分為h

2、UC-MSCs組和PBS組，分別于創(chuàng)周注射 hUC-MSCs懸液和 PBS液。分別于術(shù)后3、7、14 d觀察創(chuàng)面的愈合情況，HE染色檢測(cè)病理學(xué)改變，免疫組織化學(xué)檢測(cè)VEGF和CD34的表達(dá)，免疫熒光檢測(cè)hUC-MSCs在創(chuàng)面的蹤跡及創(chuàng)面細(xì)胞增殖情況，Western blot檢測(cè)創(chuàng)面VEGF蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：組織塊貼壁法可快速分離出大量有生物學(xué)活性的hUC-MSCs，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)提示所培養(yǎng)的細(xì)胞為hUC-MSCs，并且體外可

3、被誘導(dǎo)向成骨、成脂方向分化。CM-Dil能有效的標(biāo)記hUC-MSCs，標(biāo)記率為（95.90±1.79）％，連續(xù)傳代培養(yǎng)至15 d后標(biāo)記率仍達(dá)（87.90±1.90）%，MTT檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CM-Dil標(biāo)記對(duì)hUC-MSCs的增殖能力無(wú)影響。hUC-MSCs組創(chuàng)面愈合率在各時(shí)間點(diǎn)均較 PBS組明顯增高（P＜0.05）。病理學(xué)顯示hUC-MSCs組創(chuàng)面愈合質(zhì)量?jī)?yōu)于PBS組。免疫組化顯示hUC-MSCs組創(chuàng)面VEGF在3 d表達(dá)最多，7、14 d逐

4、漸減少，但均較PBS組增高。hUC-MSCs組創(chuàng)面血管數(shù)目在3、7 d均顯著高于PBS組（P＜0.05），但在14 d兩組創(chuàng)面血管數(shù)目無(wú)顯著差異（P＞0.05）。免疫熒光顯示CM-Dil陽(yáng)性細(xì)胞3 d時(shí)最多，7 d略減少（P＞0.05），而在14 d時(shí)明顯減少（P＜0.05），hUC-MSCs組創(chuàng)面新生表皮中BrdU陽(yáng)性細(xì)胞率7、14 d均較PBS組增加（P＜0.05），創(chuàng)面肉芽組織中BrdU陽(yáng)性細(xì)胞率在3、7 d都較PBS組增加（P＜