基于代謝組學探討大黃靈仙膠囊防治膽結石的作用機制及應用研究.pdf

1、目的：
　　觀察大黃靈仙膠囊對膽石病患者的干預療效及其膽汁代謝組學特征的改善，同時探討其防治C57BL/6小鼠膽結石模型的作用機制。
　　方法：
　　（1）臨床研究：將診斷明確為膽結石并慢性膽囊炎的142例患者按隨機、對照原則分為大黃靈仙膠囊治療組72例和消炎利膽片對照組70例。除其他正常用藥治療外，治療組給予口服大黃靈仙膠囊治療每日3次，每次6粒；對照組給予口服消炎利膽片每日3次，每次6粒，療程3個月。治療前后分別統(tǒng)

2、計兩組患者中醫(yī)癥候評分總積分、膽囊炎癥及膽結石的 B超改善情況、膽汁內源性代謝物特征改變（GC-MS），及觀察治療結束后血液實驗室檢測，隨訪評價其安全性及療效。
　?。?）基礎研究：將50只雄性C57BL/6小鼠按統(tǒng)計軟件隨機分為正常對照組（N組）、模型組（M組）、熊去氧膽酸對照組（U組）、正常藥物對照組（Y組）、大黃靈仙膠囊治療組（D組），每組10只，以下各組名稱均用簡稱代替（N,M,U,Y,D）。除N與Y組給予正常飼料喂養(yǎng)外，

3、M、U、D組均給予高脂、高膽固醇（15％脂肪、1%膽固醇、0.5%膽酸）致石飼料喂養(yǎng)。根據小鼠與成人體重等效藥物劑量換算，造模期間U組給予130 mg/kg?d UDCA干粉溶液灌胃治療，Y組和 D組每天給予大黃靈仙膠囊湯藥灌胃，大黃靈仙膠囊灌胃劑量為13g/kg?d。N組和 M組則分別給予相同體積的生理鹽水灌胃。8周后采集小鼠血清做生化檢查、膽囊結石檢測其結石成分，取相同部位的肝組織，分別使用免疫組化、PCR、Western blot

4、ting技術檢測其肝膽管側模細胞轉運蛋白基因及其蛋白表達差異。
　　結果：
　?。?）臨床研究：
　　①與對照組相比，治療組療效略高于對照組（P=0.04）；癥候積分的改善顯著高于對照組（P<0.001）；膽囊內結石改善情況優(yōu)于對照組（P=0.03）；治療后對膽汁透聲差、壁毛糙情況的改善亦優(yōu)于對照組（P=0.04，P=0.03）；
　?、谥委熐昂髮φ?，兩組患者血液檢查指標均有好轉，與對照組相比，治療組WBC、AL

5、T、AST、TBIL、DBIL、TBA的改善程度較大（均 P<0.05）；
　?、蹆山M患者治療前后膽汁內源性代謝物除 LDL外其他代謝物均有顯著性改變（均P<0.001），且與對照組相比，治療組對丙氨酸、檸檬酸、乳酸、甘氨酸、膽固醇、甘油、蘋果酸、膽堿、牛黃堿代謝物濃度改變差異均有統(tǒng)計學意義（均P<0.05）；
　?、軆山M患者均未出現明顯嚴重的不良反應和特殊事件
　?。?）基礎研究：
　　①N、Y組未見膽結石，M

6、組小鼠成石率為100%，膽囊內見顆粒樣或泥沙樣沉淀，U、D組成石率分別為44.44%、30%，兩組均低于M組（P<0.0125）；
　　②經溴化鉀壓片法紅外光譜分析出小鼠膽結石為膽固醇結石；
　?、跴CR結果：與M組相比，N、Y、D組小鼠Abcb11和Abcc2均相對升高（均P<0.001）；與U組相比，D組小鼠Abcb11 mRNA表達較高（P<0.001），與D組相比，N組、U組Abcc2 mRNA表達均較高（均P=0.

7、002）；
　?、苊庖呓M化結果：與M組相比，N、U、Y、D四組組小鼠Abcb11和Abcc2蛋白表達均升高（均 P<0.001），且其他四組互相比較均未見明顯差異；
　?、軼estern blotting結果：與M組相比，N、U、Y、D四組小鼠Abcb11和Abcc2蛋白表達均升高（均P<0.001）；與N組相比，D組Abcc2蛋白表達下降（P=0.002），與U組相比未見明顯差異。
　　結論：
　　大黃靈仙膠囊