深低溫凍存胃癌樣本的核酸與蛋白質(zhì)質(zhì)量控制研究.pdf

1、目的：腫瘤生物樣本庫建設(shè)已經(jīng)成為各大醫(yī)療中心、行業(yè)協(xié)會非常關(guān)注的項目，我國生物樣本庫起步較早，部分樣本庫中低溫庫存樣本超過10年已不罕見。為了為規(guī)范性生物樣本收集、儲存與利用提供科學依據(jù)，本文報道了上海瑞金醫(yī)院胃腸腫瘤生物樣本庫庫存不同年限（0~10年以上）胃癌生物樣本的核酸與蛋白質(zhì)的質(zhì)量控制分析報告。并選擇分子生物學常用基因或已報道在腫瘤中呈高表達基因作為候選因子，分析這些候選基因的核酸與蛋白質(zhì)表達狀況，以期為高質(zhì)量生物樣本庫建設(shè)以及

2、腫瘤轉(zhuǎn)化醫(yī)學研究提供參考。
　　材料與方法：隨機抽取瑞金醫(yī)院胃腸腫瘤樣本庫中2003年至2014年間庫存手術(shù)切除胃癌標本24對共48份。通過1％瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA與RNA純度及完整性，RNA完整性檢測增加了RIN值評估法；采用 BCA法檢測樣本蛋白質(zhì)濃度，考馬斯亮藍法測定蛋白質(zhì)分子的完整性。采用Realtime-PCR檢測組織中UBE2C/UBCH10的表達情況；從活性水平驗證蛋白質(zhì)的GAPDH、β-ACTIN和 UBE2C

3、/UBCH10的表達情況，并比較其活性差異。
　　結(jié)果：我們將組織標本按年限分成四組，分別為<2年、3-5年、6-8年、>9年進行比較分析，樣本DNA完整性各組之間無統(tǒng)計學差異（P>0.05），但正常胃組織的DNA降解程度比胃癌組織重（P=0.023）；比較四組之間RIN值顯示，低溫凍存>9年組RIN值比6-8年組和<2年組均有明顯下降（P＝0.00），保存6-8年組比<2年組也有明顯下降（P＝0.018）；各組織間在蛋白質(zhì)濃度上

4、沒有顯著差異，但在考馬斯亮藍法測定蛋白質(zhì)分子條帶上存在顯著差異，凍存超過9年組僅有低分子量（平均36.5KD）少量條帶，凍存6-8年組在中等分子量處（平均值65.63KD）可見條帶，凍存3-5年組在高分子量（平均127.5KD）可見條帶，凍存短于2年組在最大分子量指示劑處（平均值160KD）仍可見條帶。候選基因UBE2C/UBCH10在RNA及蛋白表達上，凍存5年以上組較5年以內(nèi)組均有所下降（P<0.05，P=0.00）；β-ACTIN