熱刺激誘導的細胞自噬及其對凋亡的影響.pdf

1、自噬（autophagy）是一種保守的將細胞質(zhì)中的大分子與細胞器運輸至溶酶體降解的細胞活動。通過形成特有的雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬體，自噬可以非選擇性或者選擇性地包裹細胞漿中的物質(zhì)如蛋白質(zhì)，核糖體，線粒體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等。線粒體是一種比較容易受到損傷的細胞器。及時清除細胞內(nèi)受損的線粒體對細胞維持正常的狀態(tài)具有重要的作用。細胞主要通過自噬來清除損傷的線粒體，維持細胞穩(wěn)態(tài)。
　　 凋亡，一種首先被發(fā)現(xiàn)的細胞程序性死亡的過程，其對于病理和生理的作用

2、被廣泛研究。然而凋亡并不是獨自行使功能決定細胞命運的，近年來的研究發(fā)現(xiàn)自噬可以與凋亡相互作用來影響細胞命運。在某些條件下，自噬可以作為一種細胞保護機制，抑制凋亡；另外的條件下，它可以與凋亡協(xié)作誘導細胞死亡，或作為一種支持機制來促進凋亡。因此，凋亡與自噬的相互作用是非常復雜的，有時甚至是矛盾的，但對于細胞的命運來說卻是異常關(guān)鍵的。
　　 本論文主要研究自噬對腫瘤細胞的功能作用。結(jié)果包括兩部分內(nèi)容：
　　 第一，利用激光共聚

3、焦掃描顯微鏡和熒光蛋白GFP-LC3以及線粒體標記熒光探針DsRed-Mit，在腫瘤活細胞內(nèi)實時觀測熱刺激誘導下線粒體自噬的發(fā)生。實驗結(jié)果清楚地顯示了自噬體吞噬單根線粒體的過程。采用熒光顯微鏡技術(shù)真實地顯現(xiàn)了線粒體自噬過程，為研究自噬對于細胞的功能打下基礎(chǔ)。
　　 第二，為了研究在熱刺激下自噬對于細胞的功能作用，以及自噬與凋亡的關(guān)系，采用熒光監(jiān)測GFP-cyt c，caspase3活性檢測以及流式細胞儀技術(shù)來分析自噬對細胞的影響

4、。結(jié)果表明熱刺激誘導的線粒體自噬可以保護細胞抵抗凋亡。MPT敏感的線粒體自噬通過吞噬損傷的線粒體，減少細胞色素c的釋放，進而降低caspase3的活性來保護細胞抵抗凋亡。
　　 熱療是一種傳統(tǒng)的腫瘤治療方法，經(jīng)常被應用于各種腫瘤的治療和增強化療效果，但是其作為一種單獨的治療方法時，效果并不佳。究其原因，可能是由于熱刺激后37℃孵育細胞產(chǎn)生了修復機制?；谝陨纤觯狙芯吭诩毎津炞C了熱刺激誘導的線粒體自噬是另一種有別于熱休克蛋