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文檔簡介
1、目的:
丁酸鈉是結腸腸道內細菌分解膳食纖維的終產物,對結直腸癌有抑制作用。近年來關于丁酸鈉抗結直腸癌的作用機制有大量研究,證實丁酸鈉可以作為一種組蛋白脫乙酰酶(HDAC)抑制劑發(fā)揮抗癌作用。另外還有研究證實,丁酸鈉也可通過調控微小RNA(miRNA)的表達抑制結腸癌細胞增殖,然而,其中機制并未完全明確。本實驗中,我們探索了丁酸鈉是否能通過調控miR-203的表達對結直腸癌細胞HT-29及Caco-2產生抑制作用,并進一步明確了
2、miR-203的靶基因。本實驗豐富了丁酸鈉抗癌作用的機制,并為結直腸癌分子靶向治療的新療法提供了理論依據。
材料和方法:
應用qRT-PCR和Western blot檢測HT-29及Caco-2細胞株中丁酸鈉對miR-203和NEDD9表達水平的影響;通過生物信息學檢索(TargetScan數據庫)預測miR-203的靶基因,使用雙熒光素酶報告基因檢測方法進一步驗證其靶基因;應用MTT實驗、克隆形成實驗、流式細胞儀、
3、Transwell侵襲實驗評估丁酸鈉、miR-203、NEDD9對HT-29及Caco-2細胞各項生物學行為的影響;回復實驗進一步驗證miR-203可以通過調控其靶基因NEDD9的表達發(fā)揮影響。
結果:
1.丁酸鈉上調HT-29及Caco-2細胞中miR-203的表達水平、下調NEDD9的表達水平。
2.NEDD9是miR-203的靶基因。
3.上調miR-203的表達抑制結直腸癌細胞增殖及克隆形
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