日本七鰓鰻CD45基因克隆,信息學分析及抗原刺激后表達差異.pdf

1、CD45是廣泛表達在有核造血干細胞表面的跨膜糖蛋白,也稱之為白細胞表面共同抗原,其胞漿內(nèi)存在著具有蛋白酪氨酸磷酸酶活性的結構,可通過改變Src家族蛋白酪氨酸激酶結構從而調(diào)節(jié)蛋白酪氨酸激酶的活性,在淋巴細胞的增殖、成熟、分化、細胞信號轉(zhuǎn)導、細胞粘附等過程中發(fā)揮作用。此外,編碼其胞外部分的外顯子的選擇性剪切形成的變構體依據(jù)淋巴細胞不同發(fā)育階段、活化狀態(tài)的差異選擇性表達在細胞表面,為劃分淋巴細胞的不同分化時期起到了重要的標記作用。目前,利用C

2、D45分子及其變構體的在造血細胞上表達的差異作為研究免疫系統(tǒng)疾病的切入點,在疾病的預防、早期診斷、治療等方面已取得了一定的進展。但是,在低等脊椎動物中有關于CD45基因的基礎研究還未深入展開。
　　 日本七鰓鰻是現(xiàn)存最古老的無頜類脊椎動物之一,是無脊椎動物向脊椎動物進化過程中的重要的橋梁。將七鰓鰻作為研究脊椎動物適應性免疫系統(tǒng)演化的模式動物,對于揭示脊椎動物適應性免疫系統(tǒng)的起源和進化具有深遠的意義。CD45是重要的免疫因子,它通

3、過調(diào)節(jié)蛋白激酶的活性從而在適應性免疫系統(tǒng)應答過程中發(fā)揮重要的作用。
　　 本文對日本七鰓鰻的白細胞cDNA文庫中搜索后發(fā)現(xiàn)一條有意義的CD45 EST序列,經(jīng)過與其他物種的CD45比對后發(fā)現(xiàn)它們胞漿內(nèi)結構存在著較高的同源性。隨后,從基因的保守區(qū)域開始自行設計引物,通過使用3'RACE和RT-PCR的方法,最終成功地克隆到CD45基因的cDNA全長。
　　 為了探尋與日本七鰓鰻中類淋巴細胞增殖、成熟、分化相關的免疫組織。我

4、們利用實時定量PCR的方法檢測了不同抗原刺激前后五個組織器官CD45基因表達水平的變化。在使用LPS、ConA抗原刺激日本七鰓鰻后,在五個被檢測的組織器官中,基因表達量都有不同程度的上調(diào),其中基因表達量變化明顯的組織器官是鰓、心臟、白細胞。分析后得知,而基因表達量的上調(diào)可能暗示著這些組織與日本七鰓鰻的類淋巴細胞的增殖、分化過程密切相關。此外,還利用生物信息技術對其理化性質(zhì),蛋白質(zhì)高級結構、物種間基因同源性、基因系統(tǒng)發(fā)生樹等方面進行了分析