FBXL20通過激活Wnt-β-catenin通路促進(jìn)人類食管癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲.pdf

1、目的：
　　研究FBXL20在食管癌中的表達(dá)，初步探究在食管癌中的作用及其相關(guān)機(jī)制。為食管癌的早期診斷，早期治療以及預(yù)后的評(píng)價(jià)提供新的生物學(xué)標(biāo)記物。
　　方法：
　　通過qRT-PCR以及免疫組化技術(shù)來檢測FBXL20基因在食管癌及癌旁組織中mRNA和蛋白層面表達(dá)的差異。通過qRT-PCR篩選FBXL20表達(dá)量較高的兩株食管癌細(xì)胞株，并進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染。通過qRT-PCR和Western blot技術(shù)來分析轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞株

2、中FBXL20 mRNA和蛋白表達(dá)水平差異。通過流式細(xì)胞術(shù)檢測沉默表達(dá)FBXL20對細(xì)胞周期和凋亡的影響。通過單克隆形成和CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測沉默表達(dá)FBXL20對細(xì)胞增殖能力的影響。通過Transwell實(shí)驗(yàn)檢測沉默表達(dá)FBXL20對細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響。通過Western blot實(shí)驗(yàn)分析FBXL20及Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)的因子表達(dá)情況。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析選用GraphPad Prism5和SPSS17.0軟件。

3、>　　結(jié)果：
　　本實(shí)驗(yàn)證實(shí)FBXL20在食管癌組織中較癌旁組織中是高表達(dá)，表達(dá)存在差異性。由此推測FBXL20可能在食管癌中是致癌基因，且對于食管癌的過程起到促進(jìn)作用。在體外實(shí)驗(yàn)，成功構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的沉默表達(dá)FBXL20的EC109和KYSE150食管癌細(xì)胞株，沉默表達(dá)FBXL20可以使細(xì)胞周期阻滯，增加細(xì)胞凋亡率，從而抑制細(xì)胞增殖，同時(shí)沉默表達(dá)FBXL20細(xì)胞的遷移、侵襲能力降低。我們證實(shí)FBXL20通過Wnt/β-cateni