透明質(zhì)酸衍生物載姜黃素納米粒子的制備及其抗腫瘤作用研究.pdf

1、近年來(lái)，從傳統(tǒng)中藥姜黃中提取的姜黃素（Curcumin，Cur）在癌癥治療領(lǐng)域受到越來(lái)越多的關(guān)注。姜黃素是一種多功能化的天然酚性物質(zhì)，研究者們通過(guò)對(duì)它的初步探討研究已經(jīng)判定姜黃素具有多種藥理作用，對(duì)乳腺癌、胃癌、肝癌、肺癌等癌癥有抑制作用，并且姜黃素藥源廣、價(jià)格低廉、產(chǎn)生的副作用少，因此在醫(yī)學(xué)上受到了很大推崇。另有實(shí)驗(yàn)證明姜黃素具有輔助化學(xué)治療的功效，即，它可以打破癌細(xì)胞的防御系統(tǒng)，幫助化學(xué)藥物順利進(jìn)入癌細(xì)胞。姜黃素與化學(xué)藥物一道，對(duì)前

2、列腺癌、膀胱癌、腸癌等腫瘤細(xì)胞株的聯(lián)合作用具有“一加一大于二”的加乘效果，遠(yuǎn)優(yōu)于兩者單獨(dú)的抗癌作用。然而因?yàn)榻S素存在不穩(wěn)定、溶解度低、生物利用度低、代謝率高等諸多缺點(diǎn)使其在臨床上的運(yùn)用受到很大限制。該問(wèn)題可以通過(guò)藥物制備技術(shù)與方法將姜黃素負(fù)載到納米載體上得到解決。
　　硫化氫（Hydrogen sulfide，H2S）被認(rèn)為是繼一氧化碳（CO）和一氧化氮（NO）之后的第三種氣體信號(hào)分子，與多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病都有著密切的關(guān)系，參與了

3、諸如神經(jīng)、泌尿、內(nèi)分泌、心血管、呼吸、消化、生殖系統(tǒng)以及感覺(jué)器官的功能調(diào)節(jié)過(guò)程并且對(duì)機(jī)體發(fā)揮重要作用，其生理學(xué)和病理生理學(xué)意義是現(xiàn)今學(xué)術(shù)界研究的熱點(diǎn)。近年來(lái)，人們先后發(fā)現(xiàn)或合成了一些新的硫化氫供體。這些藥物分子同時(shí)具備硫化氫的生物學(xué)作用和其母體藥物本身的療效，能夠在體內(nèi)環(huán)境緩慢地釋放硫化氫，達(dá)到優(yōu)于硫氫化鈉的效果。
　　在本研究中，我們利用水溶性透明質(zhì)酸（HA）作為藥物載體材料，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)制備姜黃素納米顆粒（HA-Cur）。同時(shí)

4、，我們還制備了一種新型的H2S供體前藥：HA-H2S供體耦合物，并進(jìn)行了體外細(xì)胞研究，以測(cè)試HA-Cur、HA-H2S供體以及這兩種耦合物的混合物對(duì)癌細(xì)胞的抑制作用。我們的研究結(jié)果表明，每一種耦合物都可以抑制乳腺癌的生長(zhǎng)，而聯(lián)合治療效果最好。
　　目的：合成HA-H2S供體，制備透明質(zhì)酸載姜黃素納米粒子（HA-Cur），并對(duì)其進(jìn)行各項(xiàng)表征、體外釋藥評(píng)價(jià)及體外抗腫瘤活性研究，通過(guò)觀察 HA-H2S供體、HA-Cur及HA-H2S供體

5、與HA-Cur混合物對(duì)癌細(xì)胞株增殖的抑制情況，初步探討HA-H2S供體、HA-Cur及HA-H2S供體與HA-Cur混合物對(duì)癌細(xì)胞株的抗癌效果。
　　方法：
　　1.利用透明質(zhì)酸（HA）與己二酸二酰肼（ADH）反應(yīng)合成己二酸二酰肼交聯(lián)透明質(zhì)酸（HA-ADH），以HA-ADH為水溶性載體材料與勞森試劑反應(yīng)，制備水溶性緩釋H2S供體（HA-H2S），以透明質(zhì)酸（HA）為載體材料與姜黃素（Cur）反應(yīng)，制備HA-Cur納米粒子，并

6、利用核磁共振氫譜（1H-NMR）、紅外光譜（IR）儀器對(duì)化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征。
　　2.通過(guò)激光粒度與Zeta電位分析儀考察所制備的載姜黃素納米粒子的平均粒徑、多分散系數(shù)（PDI）和Zeta電位，采用高效液相色譜法測(cè)定HA-Cur的載藥量，同時(shí)采用透析法考察其在PBS緩沖液（pH7.4，含0.5％的SDS）中的釋藥行為。
　　3.采用MTT比色法考察不同濃度的Cur原料藥、HA-H2S供體、HA-Cur及HA-Cur與HA-

7、H2S供體的混合物在體外對(duì)癌細(xì)胞的增殖抑制效果。
　　結(jié)果：
　　1.通過(guò)對(duì)紅外、核磁圖譜的解析發(fā)現(xiàn)，我們合成了HA-ADH、HA-H2S供體、HA-Cur耦合物，成功制備了HA-Cur納米粒子。其中HA-ADH的產(chǎn)率為61.0%，HA-H2S供體的產(chǎn)率為73.9%。
　　2.HA-Cur納米粒子的粒徑為268.5nm，載藥量為7.0%，96h的體外累積釋藥量為45.4%。
　　3.Cur原料藥、HA-H2S供體

8、、HA-Cur及HA-H2S供體與HA-Cur的混合物對(duì)MDA-MB-468乳腺癌細(xì)胞都有一定的抑制作用，其中HA-H2S供體與HA-Cur的混合物對(duì)MDA-MB-468乳腺癌細(xì)胞的抑制效果最好。
　　結(jié)論：我們成功合成了HA-ADH、HA-H2S供體、HA-Cur，所制備的透明質(zhì)酸-姜黃素和透明質(zhì)酸-硫化氫供體納米粒子粒度分布均勻，表面Zeta電位的絕對(duì)值較大，在溶液中具有較好的穩(wěn)定性。HA-H2S供體和 HA-Cur單獨(dú)給藥都