絞股藍(lán)總皂苷對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性視神經(jīng)炎視神經(jīng)及視網(wǎng)膜保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：誘導(dǎo)C57BL/6小鼠建立實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（ExperimentalAutoimmune Encephalomyelitis，EAE）動(dòng)物模型，應(yīng)用絞股藍(lán)總皂苷(Gypenosides，GPs)進(jìn)行干預(yù)，觀察小鼠神經(jīng)功能行為改變、視神經(jīng)及視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)改變、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(Retinal Ganglion Cells，RGCs)凋亡情況，探討GPs對(duì)EAE小鼠視神經(jīng)及視網(wǎng)膜的保護(hù)作用。
　　方法：應(yīng)用MOG35-55

2、多肽加完全弗氏佐劑皮下注射免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型，實(shí)驗(yàn)分為正常對(duì)照組、EAE模型組、GPs干預(yù)組、甲基強(qiáng)的松龍組（MP組）、GPs與甲基強(qiáng)的松龍聯(lián)合干預(yù)組（COM組）。自免疫后第7天起，GPs干預(yù)組每天給予腹腔內(nèi)注射GPs30mg/kg，連續(xù)給藥至動(dòng)物處死;MP組每天給予腹腔內(nèi)注射甲基強(qiáng)的松龍20mg/kg，連續(xù)給藥3天;COM組每天給予腹腔內(nèi)注射甲基強(qiáng)的松龍20mg/kg，連續(xù)給藥3天，給予腹腔內(nèi)注射GPs30mg/kg

3、，連續(xù)給藥至動(dòng)物處死。每天稱量小鼠體重，觀察記錄神經(jīng)功能表現(xiàn)、評(píng)分，于免疫后第7天進(jìn)行視覺誘發(fā)電位檢查;于免疫后第14天、第20天、第30天、第40天進(jìn)行OCT檢查，于免疫后第20天、第40天取小鼠視神經(jīng)及視網(wǎng)膜組織制成石蠟切片，采用HE染色評(píng)估視神經(jīng)、視網(wǎng)膜炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況，TUNEL法檢測(cè)RGCs凋亡改變。
　　結(jié)果：1、發(fā)病時(shí)間、評(píng)分:正常對(duì)照組小鼠未出現(xiàn)癥狀;實(shí)驗(yàn)組小鼠于免疫后一周左右體重稍有下降，后逐漸增長(zhǎng);實(shí)驗(yàn)組小鼠于

4、免疫后第9天起陸續(xù)發(fā)病。EAE組小鼠發(fā)病率為100％，神經(jīng)功能評(píng)分較高，病情最嚴(yán)重;GPs組發(fā)病率為97％，COM組、MP組發(fā)病率均為90％。COM組可推遲發(fā)病時(shí)間，與EAE組相比，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。正常對(duì)照組小鼠評(píng)分均為0分，免疫后第14天，COM組與EAE組相比，癥狀較輕，評(píng)分較低，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在其余各時(shí)間段三組藥物干預(yù)組小鼠癥狀評(píng)分與EAE組相比，總體評(píng)分較低，但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、VEP:正常對(duì)照組、EA

5、E組小鼠免疫后第7天VEP檢查結(jié)果顯示EAE組小鼠的N1波潛伏期、P1波潛伏期、P2波潛伏期均較正常對(duì)照組延長(zhǎng)，P1波振幅較正常對(duì)照組下降，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);而N2波潛伏期、P2波振幅與正常對(duì)照組相比無(wú)明顯差異。
　　3、OCT:免疫后第20天，EAE組RNFL與正常對(duì)照組、三個(gè)藥物干預(yù)組相比明顯變薄，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;三個(gè)藥物干預(yù)組之間對(duì)比差異不大，且均與正常對(duì)照組相似厚度，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。免疫后第30天，EA

6、E組RNFL進(jìn)一步變薄，EAE組、MP組RNFL與正常對(duì)照組相比均明顯變薄P＜0.01，EAE組為甚，正常對(duì)照組、GPs組、COM組相似厚度，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;三個(gè)藥物干預(yù)組均較EAE組厚，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;MP組較GPs組、COM組薄，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫后第40天，EAE組、MP組RNFL進(jìn)一步變薄，GPs組、COM組相似厚度且均與正常對(duì)照組相似厚度，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;GPs組、COM組均較EAE組、MP組為厚，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　

7、　4、HE染色:正常對(duì)照組小鼠視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)排列整齊，染色均勻，未發(fā)現(xiàn)有炎性細(xì)胞浸潤(rùn);視神經(jīng)縱切面HE染色均勻，神經(jīng)纖維整齊均勻排列，未觀察到有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)現(xiàn)象。于小鼠免疫后第20天，EAE組視網(wǎng)膜、視神經(jīng)可見較多數(shù)量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，水腫較明顯，神經(jīng)纖維排列紊亂，大量空泡形成;三個(gè)藥物干預(yù)組炎性浸潤(rùn)程度相似且均較EAE組少見，水腫較輕。于小鼠免疫后第40天，各組小鼠視神經(jīng)、視網(wǎng)膜的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)均較前減少，水腫較前減輕，三個(gè)藥物干預(yù)組與EAE

8、組相比，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層水腫較輕，炎性細(xì)胞也較少見。可見EAE組、MP組RGCs較前明顯減少，排列疏松。
　　5、TUNEL染色:正常對(duì)照組小鼠幾乎未觀察到RGCs凋亡;實(shí)驗(yàn)組均可見不同程度的RGCs凋亡，其中以EAE組、MP組最為明顯，且隨著時(shí)間的推移，凋亡細(xì)胞數(shù)目逐漸增多，與正常對(duì)照組相比具有顯著差異。GPs組、COM組凋亡細(xì)胞相對(duì)較少，隨著藥物干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)，存活的RGCs較EAE組多。
　　結(jié)論：(1)絞股藍(lán)總皂苷與甲基