促腎上腺皮質激素釋放激素對小鼠小腦皮層浦肯野細胞簡單峰電位活動的影響.pdf

1、目的：
　　小腦是哺乳動物重要的運動中樞，外部信息經(jīng)攀爬纖維(Climbing fiber，CF)和苔蘚纖維(Mossy fiber，MF)傳入小腦皮層,經(jīng)精密運算后，由浦肯野細胞(Purkinje cell，PC)發(fā)出各種輸出指令，來完成各種生理活動。促腎上腺皮質激素釋放激素(Corticotropin releasing hormone，CRH)是調控應激反應和內臟活動的一種重要神經(jīng)肽，CRH可通過傳入纖維分布于哺乳動物小腦環(huán)

2、路，影響PCs的自發(fā)性放電和指令輸出，但其影響機制尚不明確。本研究擬采用在體的電生理記錄技術以及神經(jīng)藥理學手段，在烏拉坦麻醉的狀態(tài)下，研究不同濃度CRH對小鼠小腦PC自發(fā)性單純峰電位活動的影響，探討CRH對小腦皮層PC自發(fā)性活動影響的受體機制。
　　實驗材料與方法：
　　成年（6-8周齡）ICR小鼠，腹腔注射烏拉坦(1.3 g/kg)麻醉后，于小腦Vermis區(qū)的相應部位行一個直徑為1-1.5 mm的開顱術，剝除硬腦膜，腦表

3、面的暴露部位持續(xù)給予人工腦脊液(Artificial cerebrospinal fluid，ACSF)灌流。PC自發(fā)性放電活動采用細胞外貼附式記錄記錄方法，通過膜片鉗放大器（Axopatch-200B）及數(shù)據(jù)采集軟件記錄小腦皮層PC自發(fā)性活動;CRH及受體阻斷劑采用小腦表面灌流給藥;電生理實驗數(shù)據(jù)分析采用Clampfit10.3軟件。各組數(shù)據(jù)均用Mean±S.E.M.表示，記錄細胞數(shù)用n表示,采用SPSS(Version21)軟件進行

4、數(shù)據(jù)統(tǒng)計學的分析，使用單因素方差分析進行均數(shù)的比較，P＜0.05認為有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　(1)腦表面灌流CRH，可導致PC自發(fā)性簡單峰電位放電即時頻率顯著減少，峰值左移;簡單峰電位放電頻率由給藥前的24.3±1.6 Hz降低到19.4±2.1Hz(P＜0.05)，但CRF對簡單峰電位放電的變異系數(shù)(Coefficient ofvariation，CV)無顯著影響。
　　(2)在GABAA受體阻斷劑存在下，C

5、RH可導致PC自發(fā)性簡單峰電位放電即時頻率顯著增加，峰值右移。簡單峰電位放電頻率由25.5±1.8Hz升高到30.7±2.4 Hz(P＜0.05)，表明CRF可能興奮小腦皮層抑制性中間神經(jīng)元，導致PC簡單峰電位放電頻率減少;阻斷抑制性中間神經(jīng)元的抑制性傳入后，CRH可興奮PC導致簡單峰電位放電頻率升高。
　　(3)在阻斷抑制性中間神經(jīng)元介導的GABA能突觸傳遞后，CRH對PC自發(fā)性簡單峰電位放電頻率的升高作用具有濃度依存性，引起P

6、C自發(fā)性簡單峰電位升高的半數(shù)有效濃度是53.8 nM，最大濃度是1μM。
　　(4)阻斷GABAA和AMPA受體，CRH可使PC自發(fā)性簡單峰電位頻率升高，即時頻率顯著升高，峰值右移;CRH對PC自發(fā)性簡單峰電位放電CV影響不大，表明CRH興奮PC導致簡單峰電位放電頻率升高不是通過增加CF和PF的興奮性傳入來實現(xiàn)的。
　　(5)在非選擇性CRH受體阻斷劑存在下，CRH對PC自發(fā)性簡單峰電位放電即時頻率影響消失，簡單峰電位平均頻

7、率不再升高，表明CRH通過CRF受體興奮小腦皮層PC，導致PC自發(fā)性簡單峰電位放電頻率升高。
　　(6)在CRH-R2阻斷劑存在下，CRH對PC自發(fā)性簡單峰電位放電即時頻率的影響依然存在，簡單峰電位平均頻率顯著升高，表明CRH興奮小腦皮層PC，不依賴于CRH-R2，提示CRH直接作用于PC膜上的CRH-R1而興奮PC導致自發(fā)性簡單峰電位頻率升高。
　　結論：
　　本研究結果表明，CRH可興奮小腦皮層抑制性中間神經(jīng)元導致