小檗堿對(duì)阿霉素所致心肌細(xì)胞損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：阿霉素(adriamycin)是從松鏈絲菌淺灰色變株中提取的一種蔥環(huán)類(lèi)抗生素，具有廣譜、高效的抗腫瘤作用，但是其在用藥過(guò)程中引起不可逆轉(zhuǎn)的心肌損傷,嚴(yán)重限制了其應(yīng)用范圍。阿霉素引起心肌損傷的具體機(jī)制目前尚不明確，氧化應(yīng)激、凋亡、線粒體損傷及細(xì)胞內(nèi)鈣超載均有報(bào)導(dǎo)，可能是多因素共同作用的結(jié)果。既往研究表明其因素之一是阿霉素可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ROS生成增加，而ROS可引起心肌細(xì)胞內(nèi)DNA氧化損傷，使細(xì)胞出現(xiàn)染色體畸變最終導(dǎo)致相應(yīng)細(xì)胞凋亡甚至壞

2、死。因此如何提高腫瘤治療效果，擴(kuò)大阿霉素應(yīng)用范圍，開(kāi)發(fā)心臟保護(hù)劑來(lái)抵抗阿霉素引起的心肌損傷是目前亟待解決的問(wèn)題。
　　小檗堿主要提取于中藥黃連，是一種異喹啉類(lèi)生物堿，具有清熱、解毒、瀉火、降血糖、降血脂以及調(diào)節(jié)免疫等功效。小檗堿對(duì)正常細(xì)胞毒性作用不明顯，但可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，且可減輕阿霉素引起的心肌損傷，但具體機(jī)制尚不清楚。因此本文采用多種檢測(cè)技術(shù)進(jìn)一步觀察小檗堿是否可減輕阿霉素對(duì)人源AC16心肌細(xì)胞的損傷作用，并在氧化應(yīng)激和

3、DNA水平探討其產(chǎn)生保護(hù)作用的可能機(jī)制。該研究可為臨床應(yīng)用小檗堿提供基礎(chǔ)研究資料。
　　方法：
　　1通過(guò)MTT比色法測(cè)定人源AC16心肌細(xì)胞存活率，觀察不同濃度阿霉素對(duì)心肌細(xì)胞的毒性大小，確定阿霉素的適當(dāng)濃度，從而建立其致心肌細(xì)胞損傷的模型。
　　2隨機(jī)將人源AC16心肌細(xì)胞分為六組：空白對(duì)照組、阿霉素組、小檗堿組（10μmol/L）、低濃度（1μmol/L）小檗堿+阿霉素組、中濃度（5μmol/L）小檗堿+阿霉素組

4、及高濃度（10μmol/L）小檗堿+阿霉素組。給藥后在37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。小檗堿+阿霉素組均采用給予小檗堿半小時(shí)后給予阿霉素。
　　3應(yīng)用流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞中ROS含量、彗星實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞DNA的損傷情況以及使用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)DNA修復(fù)酶X線修復(fù)交叉互補(bǔ)組1（XRCC1）及X線修復(fù)交叉互補(bǔ)組3（XRCC3）的表達(dá)情況，觀察對(duì)比各組間有無(wú)差異。
　　結(jié)果：
　　1通過(guò)濃度梯度設(shè)計(jì)，依據(jù)心肌細(xì)胞存

5、活率篩選阿霉素對(duì)心肌細(xì)胞作用最佳造模濃度，結(jié)果顯示2μmol/L為合適濃度，心肌細(xì)胞存活率明顯下降至約75%。
　　2阿霉素組心肌細(xì)胞存活率明顯低于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；小檗堿組與空白對(duì)照組比較心肌細(xì)胞存活率無(wú)明顯差異（P＞0.05）；與阿霉素組比較，低、中濃度小檗堿+阿霉素組細(xì)胞存活率升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），高濃度小檗堿+阿霉素組細(xì)胞存活率明顯升高且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。

6、　　3阿霉素組中ROS含量較空白對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而小檗堿組ROS含量與空白對(duì)照組無(wú)明顯差異（P＞0.05）；與阿霉素組比較，低、中濃度小檗堿均能降低阿霉素引起的ROS含量升高程度，但不明顯（P＞0.05），高濃度小檗堿+阿霉素組ROS含量明顯降低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4阿霉素組與空白對(duì)照組比較心肌細(xì)胞DNA損傷明顯（P＜0.05），小檗堿組較空白對(duì)照組無(wú)明顯細(xì)胞DNA損傷（P

7、＞0.05）；與阿霉素組相比，低濃度小檗堿可不同程度的改善阿霉素的DNA損傷情況，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），中、高濃度小檗堿可明顯改善阿霉素的DNA損傷，差異顯著（P＜0.05）。
　　5與空白對(duì)照組相比較，小檗堿組的DNA修復(fù)酶表達(dá)無(wú)明顯差異（P＞0.05），而阿霉素組表達(dá)明顯減少（P＜0.05）。與阿霉素組相比，低濃度小檗堿組DNA修復(fù)酶表達(dá)升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），中、高濃度小檗堿+阿霉素組DNA修