甲狀旁腺激素對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的影響.pdf

1、目的：
　　1.大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)，觀察其形態(tài)特征及鑒定表面標(biāo)志物。
　　2.對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化和成骨分化進行研究。
　　3.觀察不同濃度PTH1-34對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的影響，探討其可能機制。
　　方法：
　　1.采用貼壁法分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)，觀察其形態(tài)、細(xì)胞生長曲線，流式細(xì)胞儀檢測表面標(biāo)志物及細(xì)胞周期。
　　2.誘導(dǎo)BMSCs定向分化為

2、脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞，并通過組織染色法鑒定分化后的細(xì)胞。
　　3.以第三代BMSCs為體外試驗?zāi)Ｐ?，不同濃度甲狀旁腺激素（PTH1-34）（0、10-10、10-9、10-8mol/L）分別作用于加入成脂誘導(dǎo)液的BMSCs，14天后采用ELISA法測定LPL活性，采用RT-PCR法測定ALP和PPARγ-2 mRNA表達水平，觀察不同濃度PTH1-34對BMSCs成脂分化的影響。
　　4.統(tǒng)計學(xué)方法采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS13.

3、0軟件進行分析，計量資料的表示用X?S，采用方差分析和LSD-t檢驗進行各組間比較，P<0.05差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1.BMSCs貼壁生長，均一長梭形，生長曲線為“S”型。細(xì)胞周期測定大部分處于G1/G0期。P3代BMSCs陽性表達CD44、CD29，陰性表達CD45。
　　2.成脂誘導(dǎo)液誘導(dǎo)BMSCs分化21天后，油紅O染色可見胞內(nèi)脂滴出現(xiàn)，成骨誘導(dǎo)28天后，茜素紅染色可見鈣結(jié)節(jié)。
　　3.不

4、同濃度PTH1-34（10-10、10-9、10-8、mol/L）分別作用于BMSCs后，與未加入PTH1-34的對照組比較，LPL、PPARγ-2的表達量下降，ALP活性明顯增加，并呈劑量依賴性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.BMSCs形態(tài)為均一長梭形；穩(wěn)定表達CD44、CD29，不表達CD45；BMSCs具有向脂肪細(xì)胞和成骨細(xì)胞分化的潛能。
　　2.PTH1-34抑制BMSCs成脂分化，促