三嵌段聚合物膠束共轉運阿霉素和siRNA用于逆轉耐藥和協同抗癌的研究.pdf

1、目的：
　　制備同時遞送阿霉素和siRNA的共轉運遞藥系統(tǒng)(siRNA-Dox-micelle)，考察其腫瘤靶向及耐藥逆轉，提供一種用于協同抗腫瘤的新策略。
　　方法：
　?。?）合成N-琥珀酰殼聚糖-聚L賴氨酸-軟脂酸三嵌段聚合物(NSC-PLL-PA)，并在此基礎上制備共轉運siRNA和Dox膠束(siRNA-Dox-micelle)。
　　（2）考察siRNA-micelle、Dox-micelle和siR

2、NA-Dox-micelle的體外細胞攝取和亞細胞分布特性，探究不同阿霉素制劑在細胞內的攝取與消除。
　?。?）從細胞內藥物蓄積的角度闡明造成不同阿霉素制劑體外藥效學差異的原因。
　?。?）考察siRNA-micelle的轉染效率和siRNA-Dox-micelle的腫瘤靶向性，初步探討P-gp在細胞間的轉移對化療藥物藥效學的影響，從逆轉耐藥和增強腫瘤靶向方面提高siRNA-Dox-micelle協同增效的抗腫瘤作用。

3、>　　結果：
　?。?）通過縮合法成功地制備了NSC-PLL-PA三嵌段聚合物，N-琥珀酰殼聚糖（NSC）作為親水性外殼用于延長膠束在血液循環(huán)中的半衰期和降低聚 L-賴氨酸（PLL）的毒性，PLL作為陽離子層用以吸附siRNA，軟脂酸(PA)作為疏水層用來包載阿霉素。該聚合物在水溶液中有很強的膠束化行為，疏水端易于自聚集而壓縮進膠束內核。制備得到的膠束外觀圓整，粒徑分布均勻，能夠高效包載Dox和siRNA。并且，siRNA-Dox

4、-micelle在pH5.3條件下沒有在pH7.4條件下穩(wěn)定，易于在酸性條件下釋放所負載的Dox和siRNA。
　?。?）siRNA-Dox-micelle能同時轉運Dox和siRNA，從而使抗癌藥物和基因在同一細胞內共定位。并且隨著孵育時間的延長，細胞內的熒光增強，攜帶兩種顏色熒光的細胞比例增加，抗癌藥物和基因在同一細胞內累積從而更好的發(fā)揮協同增效的作用；Dox信號最終由細胞質擴散到細胞核，但siRNA信號始終定位于細胞質，這有

5、利于他們在各自的靶部位發(fā)揮協同增效的作用。
　　（3）共轉運膠束能夠一定程度上避開外排泵的作用，下調耐藥細胞表面P-gp的表達，增加細胞內阿霉素的濃度，并且細胞內藥物蓄積越多，引起的細胞毒性越大。
　?。?）siRNA-micelle能夠有效遞送siRNA進入靶細胞沉默P-gp的表達，但是P-gp能夠在細胞間轉移并保留其生物學活性，而且，P-gp在細胞間的傳遞不依賴于mdr1的轉錄，一定程度上限制了siRNA-micelle

6、體內療效的發(fā)揮；siRNA-Dox-micelle表現出協同增效的的抗腫瘤活性并能夠明顯改善裸鼠的生存質量；并且，siRNA在體內能夠有效逆轉腫瘤耐藥，一定程度上增強了Dox的抗腫瘤作用。
　　結論：
　　合成的NSC-PLL-PA三嵌段聚合物能夠高效負載siRNA和Dox，并且在細胞內有效釋放；制備得到的siRNA-Dox-micelle能夠靶向腫瘤部位，沉默P-gp表達，逆轉腫瘤耐藥，發(fā)揮協同抗腫瘤作用，是一種安全有效的