基于等溫放大反應(yīng)檢測(cè)microRNA.pdf

1、microRNA（miRNA）是一類內(nèi)源性的非編碼單鏈小分子RNA，約18~25個(gè)堿基，它通過(guò)與目標(biāo)信使RNA結(jié)合來(lái)調(diào)控基因的表達(dá)，據(jù)推測(cè)，miRNA調(diào)節(jié)著人類約60%的基因表達(dá)，并且miRNA的表達(dá)水平與人類某些重大疾病如癌癥密切相關(guān)。因此miRNA的定量檢測(cè)和表達(dá)分析對(duì)深入研究其生物功能、臨床診斷與治療以及相關(guān)基因藥物的開(kāi)發(fā)等具有重大意義。
　　環(huán)誘導(dǎo)等溫放大反應(yīng)能夠通過(guò)一步操作實(shí)現(xiàn)miRNA的靈敏檢測(cè)，但是該方法的一個(gè)缺點(diǎn)是

2、必須使用一條很長(zhǎng)的DNA模版，而且需要利用三條不同的引物(FIP，BIP和B3)發(fā)生多次反應(yīng)來(lái)生成該反應(yīng)的起始結(jié)構(gòu)——一條兩端成環(huán)狀的啞鈴型結(jié)構(gòu)的DNA模板，該DNA模板引發(fā)了自動(dòng)循環(huán)的鏈取代DNA的合成，最終產(chǎn)生DNA指數(shù)擴(kuò)增。在本文中，我們直接設(shè)計(jì)了一條雙環(huán)啞鈴型結(jié)構(gòu)的DNA模板，其3′端懸著一段與miRNA互補(bǔ)的序列，該方法僅用一條引物（BIP），以miRNA引發(fā)等溫放大反應(yīng)，只需一步反應(yīng)就能產(chǎn)生這條雙環(huán)啞鈴型結(jié)構(gòu)的DNA模板。利