亞低溫治療對心肺復蘇后大鼠腦組織凋亡相關蛋白和膠質纖維酸性蛋白的作用.pdf

1、第一部分：大鼠心肺復蘇后亞低溫模型的建立與評估
　　目的：利用窒息法使大鼠心臟驟停后行心肺復蘇，在復蘇后使用冰袋誘導低溫，并評估大鼠心肺復蘇后的亞低溫模型。
　　方法：將10％水合氯醛（0.3 ml/100 g）注射進腹腔內用于麻醉，然后氣管切開放置氣管插管，將套管插到股動脈和股靜脈。然后檢測動脈血壓以及記錄標準Ⅱ號導聯動態(tài)心電圖。在距離肛門1.5厘米處放置探針并使用電子溫度計來檢測直腸溫度。手術后，讓大鼠情緒穩(wěn)定15分鐘，

2、然后去除心率和血壓明顯異常的大鼠。夾住氣管，使大鼠突然心臟驟停(心電圖表現為心室顫動，無脈性電活動或心搏停止，或收縮壓下降到25 mmHg以下并且動脈搏動消失)。6分鐘后，將夾住的氣管松開，并且連接動物呼吸機為其輔助通氣，同時使用胸外心臟按壓，如果有心室纖維性顫動，使用電除顫和利多卡因靜脈注射。當自主循環(huán)恢復(自主循環(huán)標準為HR?170次/分且收縮壓?90 mmHg)，并且自主循環(huán)維持5分鐘后，終止按壓。如果在心肺復蘇6分鐘后，自主循環(huán)

3、沒有恢復，復蘇終止。當自主呼吸恢復時，撤除呼吸機。在監(jiān)測到自主循環(huán)恢復35分鐘后，移除股動脈以及靜脈插管，縫合。當大鼠蘇醒時，立即0.12 ml/100 g濃度為10%的水合氯醛注入腹腔內。在復蘇后，對照組在室溫下（25℃）治療，而亞低溫兩組使用冰袋誘導低溫，并且在誘導體溫降低后的30分鐘內，達到最佳溫度(33/30℃)。如果體溫偏離最佳溫度，予以調節(jié)。如果體溫高于預期標準，噴稀乙醇或者再結合電風扇使其降低溫度。當大鼠的體溫低于預期標準

4、，將大鼠放于室溫的環(huán)境下使其回溫。體溫的波動幅度要控制在±0.3℃內。
　　結果：大鼠在心肺復蘇后的30分鐘內，亞低溫組分別達到輕度及中度低溫溫度(33/30℃)。
　　結論：大鼠心肺復蘇后輕度及中度低溫模型建立成功。
　　第二部分：亞低溫治療對心肺復蘇后大鼠腦組織凋亡相關蛋白的作用
　　目的：探討輕度和中度低溫治療對心肺復蘇后大鼠腦組織凋亡相關蛋白的作用。方法：30只SD大鼠被隨機分成對照組(正常體溫)，體溫為

5、33℃輕度低溫組以及
　　體溫為30℃中度低溫組，每組各10只。對照組大鼠在進行心肺復蘇后，25℃室溫下接受常規(guī)治療，而輕度低溫組以及中度低溫組的大鼠經過心肺復蘇后，分別接受33℃和30℃低溫治療。所有組經過心肺復蘇24小時后，將腦組織取出進行研究，并利用免疫組化法檢測大腦皮層的凋亡相關蛋白caspase-3，用蛋白免疫印跡法（western blot）檢測凋亡相關蛋白Bcl-2以及Bax的表達。
　　結果：與對照組相比，大

6、腦神經元亞低溫組的caspase-3明顯下降(p<0.01)，體溫為30℃的低溫組與33℃低溫組相比caspase-3明顯更低，但無統(tǒng)計學意義(p?0.05)；Bcl-2的表達在亞低溫組有明顯的增加(p<0.01)，并且體溫為30℃低溫組的增加程度高于體溫為33℃的低溫組(p<0.05)；而Bax的表達在這三組中無明顯的區(qū)別。
　　結論：輕度及中度低溫可以下調caspase-3，上調Bcl-2的表達。顯示了低溫在心肺復蘇之后有保護

7、大腦的作用。并且30℃的低體溫療法比33℃的低溫療法有更好的治療作用。
　　第三部分：亞低溫治療對心肺復蘇后大鼠腦組織膠質纖維酸性蛋白(GFAP)的作用
　　目的：探討亞低溫治療對心肺復蘇后大鼠腦組織膠質纖維酸性蛋白(GFAP)的作用。
　　方法：30只SD大鼠隨機分成對照組(正常體溫)，體溫為33℃的低溫組以及體溫為30℃低溫組，每組各10只。對照組的大鼠在進行心肺復蘇后，在25℃室溫下接受常規(guī)治療，而輕度低溫組以及

8、中度低溫組的大鼠，經過心肺復蘇后在亞低溫下進行治療。在所有組經過心肺復蘇24小時后，將腦組織取出研究，并利用免疫組化法檢測大腦皮層的膠質纖維酸性蛋白(GFAP)表達。
　　結果：與對照組相比，膠質纖維酸性蛋白的表達在亞低溫組中有明顯的增加(p<0.01)。
　　結論：輕度及中度低溫通過減少caspase-3的表達以及增加Bcl-2的表達去調控神經膠質纖維酸性蛋白的表達，引起膠質纖維酸性蛋白的表達上調，從而促進大腦細胞信號轉導