硫化氫對蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷的影響及其機制的研究.pdf

1、第一部分大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后內(nèi)源性硫化氫的生成及硫化氫對早期腦損傷的保護作用
　　目的：探討蛛網(wǎng)膜下腔出血（Subarachnoid hemorrhage,SAH）大鼠內(nèi)源性硫化氫（Hydrogen sulfide,H2S）主要生成途徑及H2S對SAH后早期腦損傷（Early brain injury，EBI）的影響。
　　方法：雄性SD大鼠96只，按隨機數(shù)字表分為空白組、SAH組、SAH+NaHS低劑量組（SAH+NaHS

2、-L1.4mg/kg）、SAH+NaHS高劑量組（SAH+NaHS-H5.6mg/kg），采用視交叉前池注血法制作SAH模型，48 h后處死。測定血漿、大腦皮層H2S含量，免疫組化雙染色分別觀察大腦皮層神經(jīng)元胱硫醚-β-合酶（Cystathionine-β-synthase，CBS）、3-巰基丙酮酸轉(zhuǎn)硫酶（3-merecaptopyruvate sulfurtransferase，MPST or3-MST）定位，western blot

3、檢測CBS、3-MST表達，測定新鮮腦組織活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化酶（GSH-Px）活性，測定腦組織含水量、伊文氏藍（Evans blue,EB）含量，TUNEL評價腦神經(jīng)細胞凋亡，記錄神經(jīng)認知功能評分。
　　結(jié)果：CBS、3-MST在大腦皮層神經(jīng)元均有分布，SAH48h后CBS表達下調(diào)，3-MST表達上調(diào)，H2S含量下降，氧化應(yīng)激指標ROS、MDA含量顯著升高，SOD、GS

4、H-Px活性顯著下降，腦組織含水量、伊文氏藍含量顯著升高，Caspase3蛋白表達顯著上調(diào)，腦神經(jīng)細胞凋亡顯著增多，大鼠神經(jīng)認知功能評分顯著下降。高低劑量NaHS預(yù)處理可彌補SAH后內(nèi)源性H2S不足，可促使CBS、3-MST表達上調(diào)，可使氧化應(yīng)激指標ROS、MDA含量明顯下降，SOD、GSH-Px活性明顯增強，腦組織含水量、伊文氏藍含量明顯降低，腦神經(jīng)細胞凋亡明顯減少，大鼠神經(jīng)認知功能評分明顯改善，且高劑量效果優(yōu)于低劑量。
　　結(jié)

5、論：CBS/H2S、3-MST/H2S均參與SAH后內(nèi)源性H2S的生成，H2S對SAH后EBI具有保護作用，其作用具有劑量依賴性。
　　第二部分硫化氫對大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后急性腦血管痙攣的影響
　　目的：探討硫化氫(H2S)對大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)后急性腦血管痙攣(aCVS)的影響，并對其可能機制初步探討。
　　方法：48只雄性SD大鼠隨機均分為空白組、SAH組、NaHS低劑量組和高劑量組。造模48h后HE染色法

6、、TUNEL與免疫組化雙染色分別觀察各組大鼠大腦前動脈A2段（ACA A2段）、大腦中動脈M1段（MCA M1段）部血管形態(tài)、管腔面積以及內(nèi)皮細胞凋亡，western blot檢測腦血管組織Caspase3蛋白表達。
　　結(jié)果：大鼠SAH模型，造模后ACA A2段管腔明顯狹窄，血管內(nèi)皮細胞凋亡明顯增加，凋亡蛋白Caspase3表達明顯增強；NaHS干預(yù)可有效擴張血管、抑制內(nèi)皮細胞凋亡，顯著下調(diào)Caspase3表達，且高劑量效果優(yōu)于

7、低劑量。
　　結(jié)論：H2S可有效擴張痙攣的腦血管，其保護功能可能是通過抑制腦血管內(nèi)皮細胞凋亡起作用，而且具有劑量依賴性。
　　第三部分硫化氫對氧合血紅蛋白誘導(dǎo)的體外蛛網(wǎng)膜下腔出血模型的影響
　　目的：研究硫化氫(H2S)對體外蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)的影響及其機制的初步探討。
　　方法：氧合血紅蛋白(Oxygenated hemoglobin,OxyHb,10μΜ)模擬SAH刺激因素分別作用腦微血管內(nèi)皮細胞(br

8、ain microvascular endothelial cells，BMVECs)和神經(jīng)元
　　(Neurons)，以NaHS(15μM、30μM)預(yù)處理。24h后觀察細胞形態(tài)，統(tǒng)計BMVECs、Neurons存活率，測定活性氧ROS含量，收集細胞western blot檢測Caspase3表達。
　　結(jié)果：OxyHb干預(yù)后存活神經(jīng)元顯著減少，活性氧(ROS)含量顯著升高，Caspase3表達顯著上調(diào)；NaHS干預(yù)后存活