CSN6及相關(guān)分子在散發(fā)性大腸腺瘤癌變過(guò)程中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:
　　大腸癌是常見的胃腸道惡性腫瘤，在中國(guó)其發(fā)病率和死亡率居各種惡性腫瘤的前列，且呈逐年上升的趨勢(shì)。大腸腺瘤是大腸癌的癌前病變，約80％大腸癌是由大腸腺瘤癌變而來(lái)，但大腸癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，與包括泛素化降解過(guò)程在內(nèi)的多種因素有關(guān)，雖目前關(guān)于其機(jī)制研究較多，但具體機(jī)制尚不清楚。
　　CSN6是新發(fā)現(xiàn)的一種與泛素化過(guò)程相關(guān)的促癌基因，它是COP9信號(hào)復(fù)合體的第六亞基，在維持復(fù)合體結(jié)構(gòu)完整性上具有重要作用。研究表明

2、CSN6可調(diào)控E3泛素連接酶介導(dǎo)的泛素化活性，通過(guò)調(diào)控泛素化進(jìn)而在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮促癌作用。p-Akt是一種絲氨酸/蘇氨酸激酶，作為人體內(nèi)重要的腫瘤調(diào)節(jié)因子，對(duì)多種下游分子有調(diào)節(jié)作用，有研究發(fā)現(xiàn)CSN6具有可被p-Akt激酶磷酸化的序列，因此推測(cè)p-Akt可能作為CSN6的上游調(diào)控因子，通過(guò)磷酸化過(guò)程調(diào)控CSN6的表達(dá)。
　　此外β-catenin作為大腸腺瘤癌變經(jīng)典Wnt信號(hào)通路的核心蛋白，也是通過(guò)泛素化蛋白酶體系統(tǒng)降解的

3、，其降解依賴于泛素連接酶E3。FBXW7蛋白是構(gòu)成E3泛素連接酶復(fù)合體的重要亞基，它可特異性識(shí)別包括β-catenin在內(nèi)的多種蛋白并誘導(dǎo)其發(fā)生泛素化降解。CSN6可通過(guò)調(diào)控E3泛素化連接酶而介導(dǎo)泛素化蛋白酶體途徑，而FBXW7作為β-catenin蛋白降解過(guò)程中的E3連接酶亞基介導(dǎo)其降解。
　　目前CSN6的作用已經(jīng)逐漸受到人們的關(guān)注，但對(duì)其研究相對(duì)較少，在大腸腺瘤癌變過(guò)程中CSN6是否通過(guò)調(diào)控FBXW7影響β-catenin的

4、降解進(jìn)而介導(dǎo)大腸腺瘤癌變的發(fā)生及其如何參與腫瘤信號(hào)傳導(dǎo)目前未見相關(guān)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)的方法分析CSN6及其相關(guān)因子在正常大腸黏膜組織、大腸腺瘤組織及腺瘤癌變組織中的表達(dá)情況其與臨床病理特征之間的關(guān)系，探討其在大腸腺瘤癌變過(guò)程中可能的作用，為大腸癌的診斷和治療提供新的分子診斷依據(jù)。
　　方法：
　　1采用免疫組織化學(xué)SP法，在大腸腺瘤組織（100例）和大腸腺瘤癌變組織（101例）中檢測(cè)p-Akt、CSN6、FBXW7

5、、β-catenin和c-Myc的表達(dá)情況，分析其與臨床病理特征的關(guān)系及其之間的相互作用關(guān)系，以40例正常大腸組織作為對(duì)照組。
　　2運(yùn)用 SPSS19.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)、Fisher確切概率法和 spearman相關(guān)性分析，P<0.05代表有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1 CSN6蛋白表達(dá)情況及其與臨床病理特征關(guān)系
　　1.1 CSN6蛋白的表達(dá)情況
　　CSN6蛋白陽(yáng)性反應(yīng)定位于

6、細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)，出現(xiàn)棕黃色顆粒。其在正常大腸黏膜、大腸腺瘤及腺瘤癌變組織中均有部分陽(yáng)性表達(dá)，其陽(yáng)性率逐漸升高（25.00%、59.00%、78.22%），其中腺瘤癌變組、腺瘤組的陽(yáng)性率明顯高于正常組（P<0.05），腺瘤癌變組明顯高于腺瘤組（P<0.05）。在腺瘤組中CSN6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率與腺瘤增生程度有關(guān)，其在輕、中、重度異型增生腺瘤組織中表達(dá)依次升高（46.88%、52.63%、80.00%）,重度異型增生腺瘤組明顯高于輕、中

7、度異型增生腺瘤組（P<0.05），但輕度與中度異型增生組間無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　1.2 CSN6蛋白的表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系
　　在腺瘤癌變組織中，CSN6蛋白的表達(dá)與患者的腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均有關(guān)，T1/T2分期組中CSN6的陽(yáng)性率為72.46%，明顯低于T3/T4分期組90.63%（P<0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組89.47%，明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組71.43%（P<0.05）。但與患者年齡、性別、腫瘤的分化

8、程度、浸潤(rùn)深度及腫瘤部位均無(wú)關(guān)（P>0.05）。
　　2 p-Akt蛋白表達(dá)情況及其與臨床病理特征關(guān)系
　　2.1 p-Akt蛋白的表達(dá)情況
　　p-Akt蛋白陽(yáng)性反應(yīng)定位于細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)。其在正常大腸黏膜組織、大腸腺瘤組織和腺瘤癌變組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別20.00%、44.00%、78.22%，其中腺瘤組織和腺癌組織的表達(dá)明顯高于正常大腸黏膜組織（P<0.05），腺癌組的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于腺瘤組（P<0.05）。

9、p-Akt蛋白在輕、中、重度異型增生腺瘤組的陽(yáng)性表達(dá)率分別為37.50%、47.37%、46.67%，但各組之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2.2 p-Akt蛋白的表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系
　　在腺瘤癌變組織中，p-Akt在低分化腺癌組的陽(yáng)性表達(dá)率為91.67%，明顯高于中-高分化腺癌組70.77%（P<0.05），同時(shí)與患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤部位有關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組89.47%，明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組71.4

10、3%（P<0.05），結(jié)腸腺癌陽(yáng)性率為72.06%，明顯低于直腸癌陽(yáng)性率90.91%（P<0.05）。但與患者年齡、性別、及腫瘤分期、浸潤(rùn)深度均無(wú)關(guān)（P>0.05）。
　　3 FBXW7蛋白表達(dá)情況及其與臨床病理特征關(guān)系
　　3.1 FBXW7蛋白的表達(dá)情況
　　FBXW7蛋白陽(yáng)性反應(yīng)主要定位于細(xì)胞核，出現(xiàn)棕黃色顆粒。其在正常大腸黏膜組織、大腸腺瘤及大腸癌組織中均有陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)率依次降低，分別為95.00%、80

11、.00%、54.46%。腺癌組的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于腺瘤組及正常黏膜組（P<0.05），腺瘤組的陽(yáng)性表達(dá)率低于正常大腸黏膜組（P<0.05）。FBXW7蛋白在輕、中、重度異型增生腺瘤組中的陽(yáng)性表達(dá)依次降低（分別為87.50%、86.84%、63.33%），其在重度異型增生腺瘤組的陽(yáng)性表達(dá)率明顯低于輕、中度異型增生腺瘤組（P<0.05），但其在輕、中度異性增生組之間的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　3.2 FBXW7蛋白的

12、表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系
　　在腺癌組織中，F(xiàn)BXW7的表達(dá)與腫瘤的浸潤(rùn)深度有關(guān)，其在浸潤(rùn)深度表淺組（未浸潤(rùn)至漿膜層）的陽(yáng)性率為23.53%，明顯低于浸潤(rùn)深度較深組（腫瘤浸潤(rùn)全層）的陽(yáng)性率為60.71%（P<0.05），但與腫瘤的分期、分級(jí)、部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者的年齡、性別無(wú)關(guān)（P>0.05）。
　　4β-catenin蛋白表達(dá)情況及其與臨床病理特征關(guān)系
　　4.1β-catenin蛋白的表達(dá)情況
　　β-cat

13、enin蛋白在正常細(xì)胞中的表達(dá)主要定位于細(xì)胞膜，在腺瘤和腺癌細(xì)胞中其異位表達(dá)明顯增多，主要表現(xiàn)為在細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒。在大腸腺瘤及大腸癌組織中β-catenin均出現(xiàn)部分陽(yáng)性表達(dá)，陽(yáng)性率分別為67.00%、88.12%。在正常黏膜組織中其表達(dá)較少，陽(yáng)性率為7.50%。β-catenin在正常組、腺瘤組及腺癌組中的陽(yáng)性表達(dá)率依次升高（P<0.05），腺瘤組和腺癌組明顯高于正常粘膜組（P<0.05），腺癌組明顯高于腺瘤組（P

14、<0.05）。β-catenin蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在輕、中、重度異型增生腺瘤組織中表達(dá)依次升高，分別為53.10%、57.90%、93.30%，其中重度異型增生組明顯高于輕、中度異型增生組（P<0.05），輕度與中度異型增生組間無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　4.2β-catenin蛋白的表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系
　　在腺瘤癌變組織中β-catenin的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為97.37%，明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組

15、82.54%（P<0.05），但與腫瘤的分期、分級(jí)、部位、浸潤(rùn)深度及患者的年齡、性別均無(wú)關(guān)（P>0.05）。5 c-Myc蛋白表達(dá)情況及其與臨床病理特征關(guān)系
　　5.1 c-Myc蛋白的表達(dá)情況
　　c-Myc蛋白陽(yáng)性反應(yīng)主要定位于細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)，以細(xì)胞核為主，出現(xiàn)棕黃色顆粒。其在正常大腸黏膜組織、大腸腺瘤及腺瘤癌變組織中的陽(yáng)性表達(dá)率依次升高，分別為10.00%、74.00%、89.11%。腺瘤組及腺瘤癌變組的陽(yáng)性表達(dá)率

16、明顯低于正常黏膜組（P<0.05），腺癌組明顯高于腺瘤組（P<0.05）。c-Myc在腺瘤輕、中、重度異型增生組中表達(dá)依次升高，分別為65.63%、68.42%、90.00%，其中重度異型增生組明顯高于輕、中度異型增生組（P<0.05），輕度與中度異型增生組間的表達(dá)無(wú)明顯差異（P>0.05）。
　　5.2 c-Myc蛋白的表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系
　　在腺癌組織中c-Myc的表達(dá)與腫瘤的分期、分級(jí)、部位、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及

17、患者的年齡、性別均無(wú)相關(guān)性（P>0.05）。
　　6 CSN6與p-Akt、β-catenin、c-Myc蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析
　　相關(guān)分析結(jié)果顯示，CSN6與p-Akt、β-catenin、c-Myc的表達(dá)在散發(fā)性大腸腺瘤伴異型增生組中（r=0.288，P=0.004；r=0.107，P=0.290；r=0.201， P=0.045）及腺瘤癌變組中均呈正相關(guān)性（r=0.245，P=0.014；r=0.325， P=0.00

18、1；r=0.200，P=0.044）。
　　7 FBXW7與CSN6、β-catenin蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析
　　在腺瘤組織中，相關(guān)性分析結(jié)果顯示FBXW7與CSN6、β-catenin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.366，P=0.000；r=-0.245，P=0.014）。在腺瘤癌變組中FBXW7與CSN6、β-catenin的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.242， P=0.015；r=-0.274，P=0.005）。
　　結(jié)

19、論：
　　1 CSN6在正常大腸黏膜、不同程度異型增生腺瘤和腺瘤癌變中表達(dá)依次升高，且與大腸癌的腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示CSN6可能在散發(fā)性大腸腺瘤癌變的過(guò)程起一定作用，并與大腸癌進(jìn)展密切相關(guān)。
　　2 FBXW7在正常大腸黏膜、不同程度異型增生腺瘤和腺瘤癌變組織中表達(dá)依次降低，并且與大腸腺瘤癌變的浸潤(rùn)深度有關(guān)，提示FBXW7可能參與了散發(fā)性大腸腺瘤癌變的過(guò)程。
　　3 p-Akt及Wnt/β-catenin信號(hào)

20、通路因子β-catenin和c-Myc在正常大腸黏膜、不同程度異型增生腺瘤和腺瘤癌變中表達(dá)均依次升高，可能與大腸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。
　　4 CSN6與Akt在大腸腺瘤及癌變組織中的表達(dá)呈正相關(guān)，提示Akt作為上游調(diào)控因子可能在大腸腺瘤癌變過(guò)程中正向調(diào)控CSN6的表達(dá)，從而促進(jìn)大腸腺瘤癌變的發(fā)生發(fā)展。
　　5 CSN6在大腸腺瘤及癌變組織中與FBXW7表達(dá)呈負(fù)相關(guān)而與β-catenin、c-Myc表達(dá)呈正相關(guān)，提示CSN6可能