基于核磁代謝組學(xué)技術(shù)的黃芪抗疲勞藥效研究.pdf

1、選題依據(jù)：黃芪作為傳統(tǒng)的補(bǔ)益名藥，《神農(nóng)本草經(jīng)》列其為上品，具有補(bǔ)氣固表之功效，素有“十藥八芪”之說(shuō)。本草考證結(jié)合前期文獻(xiàn)調(diào)研發(fā)現(xiàn)黃芪具有良好的抗疲勞藥效，但其在不同微環(huán)境（生理和勞損狀態(tài)）下的藥效并未得到系統(tǒng)地研究。蒙古黃芪作為黃芪藥材市場(chǎng)的主流商品，目前出現(xiàn)了以山西渾源、應(yīng)縣等為主的野生或半野生傳統(tǒng)黃芪和以甘肅、內(nèi)蒙為主的栽培速生黃芪兩種格局，前者主要作為高端禮品芪，遠(yuǎn)銷(xiāo)國(guó)際市場(chǎng)，但資源量少，而后者在國(guó)內(nèi)藥材市場(chǎng)較為普遍，占國(guó)內(nèi)黃芪

2、產(chǎn)量的近80％。關(guān)于兩種商品黃芪藥材的品質(zhì)目前均以化學(xué)評(píng)價(jià)為主，其最可靠指標(biāo)應(yīng)為生物效應(yīng)（藥效）評(píng)價(jià)，二者在抗疲勞作用的發(fā)揮上有無(wú)差異，并未獲得系統(tǒng)性評(píng)價(jià)結(jié)果。
　　目的：闡明黃芪的抗疲勞作用機(jī)制，明確生理和勞損狀態(tài)下黃芪發(fā)揮抗疲勞作用所引起機(jī)體代謝物的差異，比較傳統(tǒng)野生蒙古黃芪和栽培速生蒙古黃芪發(fā)揮抗疲勞生物效應(yīng)方面的異同，為臨床和制藥企業(yè)分類(lèi)選擇黃芪原料提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：（1）研究生理狀態(tài)下黃芪的抗疲勞作用，對(duì)黃

3、芪水提液設(shè)置3個(gè)劑量，分別為1 g/kg、3 g/kg和6 g/kg，給藥21天后，以大鼠負(fù)重力竭游泳時(shí)間為藥效指標(biāo)進(jìn)行研究，并對(duì)血清中超氧化物歧化酶、乳酸、尿素氮、肌酸激酶以及肝臟中肝糖原含量進(jìn)行測(cè)定，再對(duì)收集到的血清、尿液、肌肉和脾臟樣本進(jìn)行1H NMR代謝組學(xué)分析；（2）研究勞損狀態(tài)下黃芪的抗疲勞作用，采用強(qiáng)迫大鼠每天力竭游泳結(jié)合限制飲食造成疲勞模型，對(duì)黃芪水提液設(shè)置3個(gè)劑量，分別為3 g/kg、6 g/kg和12 g/kg，連續(xù)

4、21天后，以第21天的負(fù)重游泳力竭時(shí)間為藥效指標(biāo)進(jìn)行研究，對(duì)血清生化指標(biāo)（甘油三酯、總膽固醇、乳酸脫氫酶、肌酸激酶、葡萄糖和尿素氮）進(jìn)行測(cè)定，再采用1H NMR代謝組學(xué)分析黃芪干預(yù)疲勞大鼠血清內(nèi)源性代謝產(chǎn)物的變化；（3）在勞損狀態(tài)下，以黃芪水提液6 g/kg的劑量比較傳統(tǒng)芪和栽培芪的抗疲勞生物效應(yīng)差異，比較第21天的游泳時(shí)間和血清生化指標(biāo)，并結(jié)合代謝組學(xué)分析血清生物標(biāo)志物的變化異同。
　　結(jié)果：（1）黃芪水提液中劑量3 g/kg對(duì)

5、于生理?xiàng)l件下的大鼠有較好的抗疲勞作用，表現(xiàn)在能顯著延長(zhǎng)大鼠力竭游泳時(shí)間，提高血清超氧化物歧化酶SOD含量和肝糖原含量，降低肌酸激酶CK的水平，清除機(jī)體運(yùn)動(dòng)產(chǎn)生的乳酸LA和尿素氮BUN；黃芪中劑量組和空白組的代謝組學(xué)結(jié)果表明，在血清、尿液、肌肉和脾臟樣本的OPLS-DA散點(diǎn)圖中，二者均呈現(xiàn)明顯分離，血清中共找出10個(gè)差異代謝物，尿液中15個(gè)差異代謝物，以及肌肉和脾臟中以氨基酸為主的15個(gè)和19個(gè)差異代謝物，可能通過(guò)調(diào)節(jié)能量代謝，包括糖代謝

6、、脂質(zhì)代謝、氨基酸代謝以及核苷酸代謝來(lái)發(fā)揮抗疲勞藥效。
　?。?）對(duì)于勞損狀態(tài)的大鼠，黃芪中劑量（6 g/kg）和高劑量（12 g/kg）均能發(fā)揮良好的抗疲勞作用，表現(xiàn)在能顯著延長(zhǎng)大鼠的負(fù)重游泳力竭時(shí)間；生化指標(biāo)測(cè)試結(jié)果發(fā)現(xiàn)黃芪能降低血清肌酸激酶含量，增高乳酸脫氫酶水平，降低甘油三酯以及總膽固醇含量，清除運(yùn)動(dòng)代謝中積累的大量乳酸，增加葡萄糖的儲(chǔ)存；血清1H NMR代謝組學(xué)表明，與模型組相比，給藥組血清中葡萄糖、TMAO、谷氨酸含量

7、上升，而乳酸、異亮氨酸、亮氨酸、纈氨酸和β-羥丁酸含量降低，與空白組趨勢(shì)一致；丙氨酸和肌酸在空白組中含量最低，在給藥組中明顯升高，且高于模型組。
　?。?）山西黃芪和甘肅黃芪均能顯著性延長(zhǎng)疲勞大鼠的力竭游泳時(shí)間，且山西黃芪略?xún)?yōu)于甘肅黃芪，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；血清生化指標(biāo)結(jié)果發(fā)現(xiàn)二者均能降低甘油三酯、總膽固醇、肌酸激酶和尿素氮的含量，升高乳酸脫氫酶和葡萄糖的水平，二者之間無(wú)顯著性差異；代謝組學(xué)表明，二者均能升高丙氨酸、谷氨酸、肌酸和氧化

8、三甲胺的含量，降低乳酸、纈氨酸、β-羥丁酸、亮氨酸、異亮氨酸、谷氨酰胺的含量，調(diào)節(jié)趨勢(shì)一致，
　　結(jié)論：本論文采用核磁代謝組學(xué)技術(shù)對(duì)黃芪的抗疲勞作用進(jìn)行了全面系統(tǒng)的研究，以傳統(tǒng)的藥效學(xué)經(jīng)典指標(biāo)、血清生化結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)黃芪水提液3 g/kg劑量對(duì)正常大鼠有抗疲勞作用，黃芪水提液6 g/kg和12 g/kg劑量對(duì)于疲勞大鼠可以發(fā)揮良好的抗疲勞作用。在整體動(dòng)物水平上，初步比較了傳統(tǒng)芪和栽培芪的抗疲勞作用，從藥效學(xué)指標(biāo)和生物效應(yīng)引