兩種現(xiàn)代分析技術(shù)在生藥研究領(lǐng)域中的應(yīng)用——以厚樸和陰地蕨屬為例.pdf

1、掃描電鏡技術(shù)是運用掃描電子顯微鏡來觀察樣品表面顯微結(jié)構(gòu)的電子光學(xué)技術(shù)。為了掌握此項技術(shù)在植物類生藥研究領(lǐng)域中的應(yīng)用，本研究以厚樸Magnolia officinalis Rehd. et Wils.、凹葉厚樸M. officinalis Rehd. et Wils. var. biloba Rehd. et Wils.及其4個近緣種（紫玉蘭Magnolia liliflora Desr.、玉蘭M. denudata Desr.、望春玉蘭

2、M. biondii Pampan.、荷花玉蘭M. grandiflora L.）的花粉為研究對象，分別采用生物學(xué)樣品掃描電鏡制備中常用的戊二醛固定法、叔丁醇真空冷凍干燥法和自然干燥法對它們進(jìn)行觀察發(fā)現(xiàn)：戊二醛固定法和叔丁醇真空冷凍干燥法處理的各物種花粉粒均有不同程度地皺縮，變形明顯，不宜用來觀察外形、表面紋飾及測量大?。幌啾戎?，自然干燥法處理的各物種花粉粒飽滿充盈，可以滿足觀測要求。因此，對于厚樸、凹葉厚樸及其4個近緣種的花粉掃描電

3、鏡制樣宜選用簡便且經(jīng)濟(jì)環(huán)保的自然干燥法。此外，研究還證實了此6種花粉的形態(tài)特征既具有科屬的共同特征也具有種的特異性，其中，種的特異性主要體現(xiàn)在花粉粒的大小和外壁紋飾的結(jié)構(gòu)上：此6種花粉的大小存在極顯著的統(tǒng)計學(xué)差異；厚樸和凹葉厚樸花粉粒表面的小穴狀紋飾小且淺，均不甚明顯；玉蘭、紫玉蘭、望春玉蘭花粉粒表面的小穴狀紋飾常在兩極和萌發(fā)溝處連成一片變?yōu)槊黠@的、不規(guī)則的小坑狀；荷花玉蘭的整個花粉粒表面密布深穴狀和網(wǎng)狀紋飾，覆蓋層延伸至兩極和萌發(fā)溝處

4、常部分缺失。本研究的研究結(jié)果可為中藥厚樸的孢粉學(xué)研究和種質(zhì)資源研究提供新的孢粉學(xué)資料，也可為現(xiàn)代植物的種及亞種級水平分類提供參考。
　　DNA分子標(biāo)記是以個體間遺傳物質(zhì)內(nèi)核苷酸序列變異為基礎(chǔ)的遺傳標(biāo)記形式，是DNA水平遺傳多態(tài)性的直接反映。本研究基于第三類DNA分子標(biāo)記技術(shù)——DNA序列的直接測定比對，以3種陰地蕨屬植物的基因組總DNA為模板，分別采用已發(fā)表的通用引物和設(shè)計的特異性引物對葉綠體psbA-trnH間隔區(qū)序列和chlL

5、基因序列進(jìn)行擴(kuò)增，并以GeneBank中同時發(fā)表了psbA-trnH間隔區(qū)序列和chlL基因序列的22種蕨類植物作為相關(guān)類群，以3種石松類植物作為外類群，采用鄰接法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹并探討它們之間的系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系，以期為國產(chǎn)陰地蕨屬植物系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系的重建篩選出合適的分子標(biāo)記。研究證實，psbA-trnH間隔區(qū)序列不易于解析親緣關(guān)系較遠(yuǎn)的物種，而 chlL基因序列可能在種及以上水平上均具有較高的分辨率。研究還發(fā)現(xiàn)陰地蕨種內(nèi)chlL基因序列的2種