菝葜抗肺癌活性部位的篩選及其作用機(jī)制研究.pdf

1、菝葜，又名金剛藤，為百合科植物Smilax china L.的干燥根莖。作為我國(guó)常用中藥，收載于《中國(guó)藥典》2005版及2010版一部。菝葜具有清熱解毒、軟堅(jiān)散結(jié)、活血化瘀之功效，是中醫(yī)臨床治療腫瘤疾患的常用配伍組方藥味，以其為君藥的中藥復(fù)方制劑復(fù)方菝葜顆粒，臨床用于治療肺癌效果明顯。
　　本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，菝葜酚酸類成分為其抗癌有效物質(zhì)。本論文對(duì)菝葜抗癌活性物質(zhì)部位進(jìn)行了篩選，界定菝葜抗肺癌主要有效物質(zhì)為鞣質(zhì)類成分，并對(duì)其進(jìn)

2、行了抗癌機(jī)制研究，探討其抗癌途徑。
　　采用溶劑法、明膠沉淀法和大孔樹(shù)脂純化技術(shù)，將菝葜提取分離為乙醇粗提物、總鞣質(zhì)部位和總黃酮部位。通過(guò)經(jīng)典的臺(tái)盼藍(lán)染色法結(jié)合細(xì)胞計(jì)數(shù)儀，測(cè)定上述三種提取分離物質(zhì)抗A549、NCI-H23及NCI-H522三種NSCLC細(xì)胞的活性作用。結(jié)果顯示，菝葜總鞣質(zhì)部位組作用于三種細(xì)胞致其死亡率均最高，且呈劑量相關(guān)性。揭示了菝葜鞣質(zhì)類成分為其主要抗肺癌活性物質(zhì)。
　　通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和阻滯細(xì)胞周期兩個(gè)

3、途徑探討菝葜鞣質(zhì)的抗癌機(jī)制。采用AnnexinV-FITC/PI雙染細(xì)胞，給藥不同濃度菝葜總鞣質(zhì)，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率及PI單染細(xì)胞的周期分布情況。結(jié)果顯示，菝葜鞣質(zhì)通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和使其細(xì)胞周期阻滯在G1期，從而達(dá)到抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用。采用western blot檢測(cè)抗凋亡因子bcl-2、促凋亡因子bax及由G1期轉(zhuǎn)變?yōu)镾期的節(jié)點(diǎn)蛋白cyclinD2的表達(dá)水平，結(jié)果顯示bcl-2及cyclinD2隨藥物濃度的增加表達(dá)下降，