增殖的組織細胞中糖代謝增強.pdf

1、目的：糖代謝是生物體內普遍存在的能量代謝過程。在血管損傷和惡性腫瘤組織中的糖代謝活躍，以滿足細胞增殖的需要。目前，有關糖代謝異常與增殖性疾病的關系仍尚未完全清晰。本文通過觀察小鼠頸總動脈內皮損傷模型、惡性腫瘤及腫瘤細胞系中糖代謝途徑關鍵酶的活性變化，探討糖代謝與細胞增殖的關系，為理解增殖細胞的糖代謝規(guī)律提供實驗依據。
　　方法：⑴隨機選取C57BL/6小鼠，雄性，8~12周，13只。異氟烷吸入式麻醉，行單側頸總動脈結扎，設為血管損

2、傷組；對側頸總動脈不作處理設為假手術組。血管損傷組和假手術組分別于結扎術后14天，心臟灌流后取小鼠頸總動脈并將血管分為兩部分，一部分勻漿，提取組織蛋白，分別用Western blot方法和己糖激酶活性測定試劑盒檢測血管壁中葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD）的表達和己糖激酶（hexokinase，HK）活性；另一部分取材后，進行脫水、石蠟包埋、切片、免疫組織化學染色法檢測

3、糖酵解途徑中最后一個關鍵酶丙酮酸激酶-2（pyruvate kinase-2，PKM2）的表達。⑵收集2014年7月-2015年11月期間河北醫(yī)科大學第四醫(yī)院外二科結直腸癌的標本30例，以結直腸癌組織標本為實驗組，距腫瘤10 cm以外的正常腸粘膜組織為對照組。標本分為兩份，一份放入-80℃冰箱中凍存，隨后用Western blot方法檢測標本中G6PD、PKM2的表達，用己糖激酶活性測定試劑盒檢測HK活性；另一份放入4％的多聚甲醛組織固

4、定液中固定，隨后進行脫水、石蠟包埋、切片及免疫組化染色檢測G6PD及PKM2的表達。⑶無菌環(huán)境下培養(yǎng)人結腸癌腫瘤細胞系HCT116細胞和人正常結腸粘膜上皮細胞系FHC細胞，用Western blot方法檢測兩種細胞中G6PD和PKM2的表達，用己糖激酶活性測定試劑盒檢測HK活性。
　　結果：①C57BL/6小鼠頸總動脈結扎損傷后第14天，Western blot結果顯示，損傷側G6PD的表達明顯高于對照側（P<0.05）；并且HK

5、活性變化趨勢與G6PD相似，損傷側HK的活性明顯高于對照（P<0.05）；免疫組織化學結果顯示，損傷側PKM2的陽性顆粒數明顯升高（P<0.05）。②Western blot結果顯示，30例患者腫瘤組織中G6PD和PKM2的表達水平高于癌旁正常組織(P<0.05)。腫瘤組織中HK活性水平高于癌旁正常組織(P<0.05)；免疫組織化學結果顯示，腫瘤組織中G6PD和PKM2的陽性顆粒數高于癌旁正常組織(P<0.05)。③Western bl