美洲大蠊成蟲腸道細菌多樣性研究.pdf

1、昆蟲是動物界中最大的類群，現存種類已超過100萬種。我國昆蟲資源相當豐富，約占世界昆蟲總數的10％。昆蟲共生菌可能是新型天然產物的廣泛來源和新活性天然產物的重要來源，但是昆蟲腸道微生物的研究尚欠系統(tǒng)和深入，所涵蓋的昆蟲種類僅零星見于少數，如蝎子、蜜蜂等。較為詳細的研究主要集中在白蟻，還有松毛蟲等農作物害蟲，而美洲大蠊腸道微生物的研究鮮有報道。
　　本研究主要運用數值分類，BOX-PCR，PCR-RFLP和16S rRNA基因序列的

2、系統(tǒng)發(fā)育分析以及免培養(yǎng)方法對樣品中內生細菌多樣性進行研究，結果表明，美洲大蠊成蟲腸道內有較為豐富的細菌多樣性。主要結果如下:
　　數值分類的分析結果表明，32株代表菌株在82％相似水平上可分為12個表觀群，群11是最大的類群，包含14株細菌;而代表菌株SCAU13，SCAU78，SCAU23，SCAU75，SCAU9，SCAU92分別單獨成群。
　　在PCR-RFLP分析中，用四種限制性內切酶（HaeⅢ，HinfⅠ，TaqⅠ

3、，MspⅠ）處理后，HaeⅢ有8種酶切圖譜類型，HinfⅠ有7種酶切圖譜類型，TaqⅠ有3種酶切圖譜類型，MspⅠ有2種酶切圖譜類型，酶HhaⅢ較其他3種酶的帶型豐富，可以說HhaⅢ是研究細菌多樣性較為有效的酶。
　　在BOX-PCR分析中，在72％的相似水平處，所有的菌株都聚在一起，在86％的相似水平上，供試菌株可分為10個群。在10個遺傳群中，群Ⅱ最大，共有21株菌株，其次為群Ⅳ，由7個菌株組成。
　　同過測序比對，分離

4、菌株代表20個物種，屬于4個大的系統(tǒng)發(fā)育類群(Proteobacteria，Bacteroidetes，Firmicutes，Actinobacteria)的10個科、15個屬。多數菌株屬于Proteobacteria門(15株，占46.9％)和Bacteroidetes門(10株，占31.3％)。Shannon-Wiener多樣性指數(H)為4.87，均勻度指數(E)為1.62，表明美洲大蠊相關可培養(yǎng)細菌具有較高的物種多樣性和均勻度。

5、
　　在免培養(yǎng)分析中，相似性比對分析表明，26個OTU屬于細菌域4個大的系統(tǒng)發(fā)育群(Proteobacteria，Bacteroidetes，Firmicutes，Actinobacteria)的8個科、13個屬，多數菌株屬于變形菌門(Proteobacteria，占56.9％)和擬桿菌門(Bacteroidetes，占21.4％)，其次屬于厚壁菌門(Firmicutes，占18.8％)，還有未確定分類的細菌(unclassifi