microRNa-33-122調控草魚肝臟脂質代謝的作用及分子機制研究.pdf

1、單位代碼 j 0 4 7 6學 號 1 4 2 0 1 8 3 0 0 5分類號 S 9 6 3‘㈦J I i | J l 州川 川??州《——礦3 2 6 1 9 0 2河南{ ；彳蕁己大學碩士學位論文m i c r o R N A ．3 3 ，1 2 2 調控草魚肝臟脂質代謝的作用及分子機制研究學科、專業(yè)研究方向申請學位類別申 請 人指導教師：水產學、水產養(yǎng)殖學：水產動物營養(yǎng)與品質調控：農學碩士：楊峰：盧榮華副教授二O 一七年六月摘

2、要在目前集約化水產養(yǎng)殖模式下，草魚( C 紀胛叩辦口秒唧如挖f 如砌) 作為我國產量最大的經濟魚類，在實際養(yǎng)殖過程中，特別容易出現(xiàn)肝臟脂肪過度蓄積進而導致脂質代謝紊亂等癥狀，免疫力也下降，嚴重者則表現(xiàn)為脂肪肝。因此，如何提高魚類肝臟對脂肪利用能力及肝脂質蓄積調控的研究已顯得非常迫切和必要。近年來，關于I n i c r o 對妊( m j R N A ) 的研究越來越深入。研究顯示面I 玳A 參與陸上動物的膽固醇、甘油三酯和脂肪酸代謝等

3、，因而在脂質代謝調控中發(fā)揮重要作用。目前，有關1 1 1 i R N A 調控魚類脂質代謝的研究還不深入，相關機理還不明晰。本研究主要以草魚和草魚肝細胞系( L 8 8 2 4 )為實驗材料，采用基因克隆、基因過表達及干擾、q R T - P C R 、酶活性測定及腹腔注射等營養(yǎng)學、生物化學、分子生物學和細胞生物學相關技術與方法，在活體與細胞水平上較系統(tǒng)地研究了l l l i R - 3 3 ／1 2 2 調控草魚肝臟脂質代謝的作用及初

4、步機理。研究結果為豐富魚類脂質代謝調控機理提供了基礎資料，為防治魚類營養(yǎng)性脂肪肝等代謝性疾病及提高機體免疫力提供了思路及理論基礎，進而為促進魚類健康生長提供了科學依據。本文主要的研究結果和結論如下：1 ．m 諏．3 3 調控草魚肝臟脂質代謝研究為探究血R 一3 3 調控草魚肝臟脂質代謝的作用及初步機理，本項研究首先采用R T ．P C R 技術，克隆了I l l i R - 3 3 的前體序列，并進行了同源性比對和組織分布規(guī)律分析。結果

5、顯示，I I l i R - 3 3 的前體長度為6 5 b p ，和其它物種的同源性較高；構建系統(tǒng)進化發(fā)育樹也顯示草魚I I l i R ．3 3 和魚類面R ．3 3 的進化關系最近；組織分布規(guī)律顯示在腦、眼睛、肝臟、肌肉和腸道中表達量較高，而在腎臟、脾臟、心臟和脂肪中的表達量較低。本研究采用m R 一3 3m h i c ( r n j R 一3 3 模擬物) 轉染草魚肝細胞L 8 8 2 4 的方法，開展了m 釀．3 3 的功能

6、研究。實驗設置三個組，空白對照組、陰性對照組和m 諏．3 31 1 1 i m i c 轉染組，處理2 4 h 后收集細胞。采用油紅O 染色提取法檢測了L 8 8 2 4 細胞中甘油三酯( T G )含量，q R T - P C R 技術檢測了與脂質代謝相關基因的n Ⅱ斟A 表達水平。結果顯示，相對于空白對照組和陰性對照組，I I l i R ．3 31 1 1 i m i c 轉染細胞2 4 h 使r n i R - 3 3 超表達后