醫(yī)學免疫學第五版電子書

1、1第二十二章免疫學檢測技術的基本原理第一節(jié)體外抗原抗體結合反應的特點及影響因素（一）抗原抗體反應特點1高度特異性抗原與抗體的結合具有高度特異性，這種特異性是由抗原表位與抗體分子中的超變區(qū)互補結合所決定的?？臻g構型互補程度越高，抗原表位與抗體可變（V）區(qū)之間結合力越強，抗原抗體結合的特異性越強，親和力也越高。利用這一特點，在體外可以對許多未知的生物學物質進行特異性鑒定。如利用抗傷寒桿菌的抗體檢測傷寒桿菌；也可用已知的抗原（如乙型肝炎病毒）

2、來檢測相應的抗體（抗乙型肝炎病毒抗體）。2表面化學基團之間的可逆結合抗原抗體結合除了空間構象互補外，主要以氫鍵、靜電引力、范德華力和疏水鍵等分子表面的化學基團之間的非共價方式結合。這種非共價鍵不如共價鍵結合穩(wěn)定，易受溫度、酸堿度和離子強度的影響而解離，解離后抗原和抗體仍具有原有的特性。解離度主要取決于兩個方面：一是抗體與抗原結合的親和力（affinity）。親和力指抗體分子單一抗原結合部位與一個相應抗原表位之間互補結合的強度?？贵w親和力

3、越高，解離度越低；反之抗體的親和力越低，解離度越高。二是抗原抗體反應的環(huán)境因素如溫度、酸堿度和離子強度。因此在體外進行抗原抗體反應時，要求適當?shù)臏囟?、酸堿度和離子強度等條件。34抗原抗體反應的兩個階段抗原抗體反應可分為兩個階段：第一個階段是抗原抗體特異性結合階段。抗原分子與抗體分子之間是互補的非共價結合，該反應迅速，可在數(shù)秒鐘至幾分鐘內完成，一般不出現(xiàn)肉眼可見的反應。第二階段為可見反應階段，是小的抗原抗體復合物之間靠正、負電荷吸引形成較

4、大復合物的過程。此階段所需時間從數(shù)分、數(shù)小時至數(shù)日不等，且易受電解質、溫度和酸堿度等條件的影響。（二）抗原抗體反應的影響因素1電解質抗原、抗體通常為蛋白質分子，等電點分別為pH3~5和5~6不等，在中性或弱堿性條件下，表面帶有較多的負電荷，適當濃度的電解質會使他們失去一部分的負電荷而相互結合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團塊或沉淀物。實驗中常用0.85%的NaCl或其他離子溶液作稀釋液，以提供適當濃度的電解質。2溫度適當提高反應的溫度可增加抗原與

5、抗體分子的碰撞機會，加速抗原抗體復合物的形成。在一定范圍內，溫度越高，形成可見反應的速度越快。但溫度過高（56℃以上），可使抗原或抗體變性失活，影響實驗結果。通常37℃是抗原抗體反應的最適溫度。3酸堿度抗原抗體反應的最適pH在6~8之間，pH過高或過低，均可直接影響抗原、抗體的理化性質。此外，當抗原抗體反應液的pH接近抗原或抗體的等電點時，抗原抗體所帶正、負電荷相等，由于自身吸引而出現(xiàn)凝集，導致非特異性反應，即假陽性反應。第二節(jié)檢測抗原

6、和抗體的體外試驗抗原和其相應抗體在體外相遇可發(fā)生特異性結合，由于該反應是高度特異性的，因此可以用已知的抗原（或抗體）來檢測未知的抗體（或抗原）。由于抗原物理性狀的差異或參加反應的其他輔助成分的不同，可出現(xiàn)不同類型的反應。如凝集反應、沉淀反應、中和反應及免疫標記技術等。實驗所采用的抗體常存在于血清中（還可存在于關節(jié)液、腦脊液、腹水及胸水中），因此習慣上將體外的抗原抗體反應稱之為血清學反應（serologicalreaction）或血清學試