應用組織芯片技術研究肺癌中Ets1 mRNA表達的生物學意義和相關分子機制.pdf

1、第一部分細胞芯片研究初探 目的：進行細胞芯片的研制，為快速、規(guī)范、簡便、經濟地進行各項細胞學臨床和科研工作提供一種新的技術方法。 材料與方法：設計7×16點陣，運用自制的細胞陣列檢測裝置(專利申請?zhí)枺?005200278140)，選取含有腫瘤細胞的肺癌患者的胸水50例、非腫瘤患者胸水6例，經離心等處理后，用微量移液器點入陣列相應位置，每例2個點，即制成細胞芯片。經固定后進行HE、免疫組化或熒光原位雜交等檢測，檢驗結果與每

2、例常規(guī)涂片進行對比。同時對該細胞芯片的研究結果與中晚期肺癌的組織芯片的研究結果進行比較，應用四格表x2檢驗作統(tǒng)計學分析，檢驗水準α值規(guī)定為0.05。 結果：1細胞芯片HE染色結果制成的細胞芯片為112點，7×16點陣，點陣排列整齊，分布均勻，無掉片。將HE染色的細胞芯片各點進行顯微鏡下觀察，檢測結果與同時制作的相應涂片進行比較，結果完全一致。50例肺癌標本均可見腫瘤細胞。 2細胞芯片熒光原位雜交結果對細胞芯片進行了Ets

3、1mRNA熒光原位雜交檢測，熒光顯微鏡下觀察：熒光清晰，背景干凈，腫瘤細胞胞漿呈黃綠色熒光，而細胞核無熒光顯示。所得陽性結果與各例相應涂片檢測結果一致。 將細胞芯片檢測結果與進行Ets1mRNA熒光原位雜交的Ⅲ+Ⅳ期肺癌的組織芯片陽性率進行比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 3細胞芯片免疫組化染色結果對細胞芯片進行了c-Met免疫組化染色后，細胞無明顯減少，所得陽性結果與各例相應涂片檢測結果完全一致。 將細

4、胞芯片檢測結果與進行c-Met免疫組化染色的Ⅲ+Ⅳ期肺癌的組織芯片陽性率進行比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 2結論：1細胞芯片可以替代細胞涂片進行臨床診斷和科學研究，尤其在樣本較多的情況下更顯示其優(yōu)越性。 2細胞芯片有望用于胸水、腹水、尿液、心包積液、腦脊液、痰以及培養(yǎng)細胞等細胞學檢測，具有診斷快速準確、特異性高、信息量大的特點，在臨床診斷、科研和流行病學篩查中有廣泛的應用前景。 3本研究制作細胞芯片操

5、作簡單；細胞標本取來就可以開始操作，用時短；可以實現(xiàn)不同批次的標本同時進行免疫組化或原位雜交等檢測，可以節(jié)約試劑及實現(xiàn)實驗條件的標準化，減少系統(tǒng)誤差。 4將培養(yǎng)的細胞制作成細胞芯片，用于高通量地研究基因或蛋白質表達的差異、試驗藥物的敏感性、毒性試驗以及轉染目的基因克隆的篩選等領域有望發(fā)揮巨大的作用。 5細胞芯片也有它的不足之處，如細胞陣列不能提供組織學結構的信息，與組織芯片配合使用將在科學研究中發(fā)揮更大的作用。