登革病毒2型外膜E蛋白基因DIII區(qū)的表達及其在血清學診斷方面的應用研究.pdf

1、最近幾十年來,由于全球人口數(shù)量和流動性持續(xù)增加,登革熱在全球的流行范圍不斷擴大,并已成為目前世界上分布最廣、發(fā)病最多的蟲媒病毒病,對人類健康造成嚴重的威脅。由于缺乏疫苗,登革熱的防治一直是世界性難題。除了媒介控制外,感染者的及時發(fā)現(xiàn)、隔離以及治療是目前預防登革熱進一步擴散的重要手段,因此,早期診斷對于登革熱的預防控制至關重要。
　　登革熱的早期診斷一直是登革熱防治研究領域的熱點,相關的實驗診斷技術也在不斷發(fā)展,包括病毒核酸檢測、抗

2、原抗體檢測在內的多種實驗診斷技術已被應用于常規(guī)的實驗檢測工作。目前,國外已經有多家試劑公司研制成功并推出了包括酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)、膠體金免疫層析法(ICT)等在內的商品化病毒抗體檢測試劑盒,此類試劑盒具有快速、操作簡便等特點,為大多數(shù)實驗室,特別是基層實驗室所采用。近年來,國內雖然也有不少研究機構開展登革病毒抗體檢測試劑盒的研制,并有相關研制的報道,但其實際應用一直沒有取得突破,試劑的國產化一直是國內登革熱防控工作的短板。

3、r>　　本課題以登革2型病毒外膜蛋白(envelope,E)為研究對象,在其編碼基因的DIII區(qū)上下游各設計8條引物,分別引入NdeI和XhoI兩個酶切位點,交叉配對共擴增出64條DIII區(qū)基因片段,利用pET30a(+)表達系統(tǒng)在大腸桿菌BL21(DE3)中分別克隆和表達,經SDS-PAGE和Westernblot驗證其表達含量及重組蛋白的免疫反應性,篩選表達量大且有較強免疫反應性的重組蛋白抗原進行純化并建立間接ELISA法用以檢測登

4、革熱IgM抗體,為國產試劑提供候選抗原和方法。
　　為評價實驗建立的ELISA法檢測效果,我們以Panbio公司生產的登革熱IgM檢測試劑盒作為對照,選取112份臨床血清標本進行了初步的試劑評估。檢測結果表明,以IFA檢測結果為金標準,本研究ELISA法檢測IgM的靈敏度為94.64％,特異度為91.07%;與Panbio公司生產試劑盒相比,本研究建立的ELISA法檢測登革病毒IgM抗體的檢測陽性符合率為92.85%,陰性符合率為