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簡介：分類號分類號R741學校代碼學校代碼10114密級學號學號20070020呂梁地區(qū)農村認知功能障礙與同型半胱氨酸相關性研究呂梁地區(qū)農村認知功能障礙與同型半胱氨酸相關性研究THERELATIONSHIPBETWEENPLASMAHOMOCYSTEINEWITHMILDCOGNITIVEIMPAIRMENTANDALZHEIMER’SDISEASEINRURALAREAOFLVLIANG研究生生楊洋指導教師牛小媛師牛小媛申請學位每類級別醫(yī)學碩士（專業(yè)學位）申請學位每類級別醫(yī)學碩士（專業(yè)學位）專業(yè)名稱神經病學稱神經病學研究方向腦血管病與神經變性病向腦血管病與神經變性病所在學院第一臨床醫(yī)學院院第一臨床醫(yī)學院中國中國山西山西二O一四年五月十三日一四年五月十三日目錄摘要IABSTRACTABSTRACTⅡ前言1研究對象和方法研究對象和方法4結果7討論9結論1212參考文獻參考文獻1313綜述15參考文獻參考文獻1919個人簡歷個人簡歷21致謝22

簡介：808029甲肝、乙肝病毒基因隨機肽展示庫的構建及肝細胞肝癌細胞受體特異性配體的篩選CONSTRUCTL0NOFHAVANDHBVGENEDERIVEDRANDOMPEPTIDELIBRARYANDSCREENINGFORLIGANDSOFSPECIFICRECEPTORONHUMANLIVERANDHUMANLIVERCANCERCELLS博士后姓名朱以萍流動站F一級學科名稱復旦大學生物學專業(yè)二級學科名稱微生物學研究工作起始時間2002年7月4日研究工作期滿時問2004年7月6日復旦大學研究生院上海2004年7月ABSTRACTNISWELLAPPROVEDTHATHEPATITISVIRUSINFECTIONHASPLAYEDACRUCIALROLEINCAUSINGCIRRHOSISANDHCCOFHUMAN．HCCISRANKEDASONEOFTHEFIVELEADINGHUMANCANCERSWORLDWIDE．CAUSINGATLEASTL250000DEATHSANNUALLY．ASCONVENTIONALTREAMAENTOFHCC，SURGERY,RADIOTHERAPYANDCHEMIOTHERAPYWERENOTSOEFFICIENTFORMOSTLATESTAGEOFLEAVERCANCENITCOULDEVENBEHELPLESSANDHARMFULTOTHEPATIENTS，BECAUSEOFTHEIRADLIBITUMMATMER，ASITWOULDKILLNOTONLYTHEILLCELLSBUTALSOTHEHEALTHYCELLS．WITHTHEDEVELOPMENTOFPEPTIDEDISPLAYTECHNIQUEANDEFFICIENTMEASURESOFISOLATINGSPECIFICORGANMADTISSUEHOMINGPEPTIDE，TARGETEDTHERAPYOFHCCCOULDBECOMETRUE．INTHISREPORT,TWORANDOMLIBRARYOFGENEFRAGMENTDERIVEDFROMHAVANDHBVGENOMEWASGENERATEDBYDNASEICLEAVAGEANDCLONEDINTOT7SELE護PREDIGESTEDARMS．AFTERSEVERALROUNDSOFBIOPANNINGWITHNORMALLEAVERCELLSL02OR／ANDLEAVERCANCERCELLSHEPG2，RESULTEDPHAGESWEREAPPLIEDTONUDEMICETHATBEARINGTUMORWHICHINDUCEDBYINOCULMINGCORRESPONDINGCELLSFORFURTHERENRICHMENTOFL02ORHEPG2SPECIFICBINDINGPHAGES．FROMLASTPOOLOFPHAGES，SINGLEPLAQUEORIGINATEDPHAGEDNAWASPURIFIEDANDWASEMPLOYEDASPCRTEMPLATEFORSEQUENCEANALYSISOFINSERTFRAGMENT．ASARESULT，ONEINSERTSEQUENCEANDIT’SDEDUCEDPEPTIDESTRUCTUREWASPRESENTED，BUTMORERESEAMHDATAWASNEEDEDFORFURTHERINVESTIGATIONINTOTHEMATTER．KEYWORDSHEPATITISVIRUS，RANDOMPEPTIDELIBRARY,TARGETEDTUMORTHERAPY

簡介：目的應用實時熒光定量逆轉錄多聚酶鏈反應FLUOGENICQUANTITIVEREVERSETRANIONPOLYMERIZECHAINREACTIONFQRTPCR方法，檢測經人巨細胞病毒HUMANCYTOMEGALOVIRUS，HCMV感染和或全反式維甲酸ALLTRANSRETINOICACID，ATRA和或三氧化二砷ARSENICTRIOXIDE，ATO，AS2O3處理的人臍血造血紅系祖細胞COLONYFMINGUNITERYTHROID，CFUE；BRUSTFMINGUNITERYTHROID，BFUE的HOXB6HOMEOBOXB6GENE基因的MRNA定量表達情況，在基因水平探討HCMV感染導致造血紅系祖細胞損害的機制。方法13例臍血標本由本院產房提供，取自正常足月順產新生兒斷臍后的胎盤段臍血。采用造血祖細胞體外培養(yǎng)技術，以HCMV持續(xù)感染和或ATRA和或AS2O3處理人臍血紅系祖細胞，觀察HCMV感染后和或ATRA和或AS2O3處理后的CFUE，BFUE集落形態(tài)及峰期。2實驗分組實驗分成6組①空白對照組在正常培養(yǎng)體系中，不加任何的處理因素。②HCMV組按100TCID50HCMVAD169病毒液01ML感染正常的培養(yǎng)體系。③ATRA組在正常培養(yǎng)體系中加入維甲酸，終濃度為106MOLL。④HCMVATRA組在上述同樣的人巨細胞病毒組中加入維甲酸，終濃度同上。⑤AS2O3組在正常培養(yǎng)體系中加入三氧化二砷，終濃度為106MOLL。⑥HCMVAS2O3組在上述同樣的人巨細胞病毒組中加入三氧化二砷，終濃度同上。3采用原位聯(lián)苯胺染色法鑒定紅系祖細胞。4不同時間點即第3天，第7天，第10天分別提取各組細胞RNA，用1％甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳檢測RNA分子的完整性。5利用逆轉錄聚合酶鏈式反應RTPCR技術和隨機引物將總RNA逆轉錄成CDNA，設計基因特異引物在實時熒光定量PCR儀進行體外擴增。將HOXB6基因CDNA和人磷酸甘油醛脫氫酶GLUCERALDEHYDEPHOSPHATEDEHYDROGENASEGAPDH基因陽性產物CDNA梯度稀釋制作各自的標準曲線，根據各個樣本循環(huán)指數增長期的起始點即循環(huán)域值CYCLETHRESHOLDCT和標準曲線斜率值計算各樣本起始CDNA模板量倍數值，以GAPDH基因作為內參照進行標化，統(tǒng)計并分析各組樣本的HOXB6基因表達的MRNA是否存在差異。統(tǒng)計方法結果用均數加減標準差X±S，進行單因素方差分析，有統(tǒng)計學意義后組間均數用兩兩比較方法，由統(tǒng)計軟件SPSS115完成。結果1集落細胞的形態(tài)學鑒定，原位聯(lián)苯胺染色法證明所培養(yǎng)的是造血紅系祖細胞。21％甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳顯示RNA電泳圖的5S18S28S三條帶型整齊，無明顯拖尾及彌散，說明RNA結構完整，無明顯降解。3逆轉錄PCR擴增三組均有目的基因HOXB6和內參照GAPDH基因的CDNA的產生，與DNA分子MARKER相比示擴增產物大小分別為119BP和141BP。4HOXB6基因MRNA在6個組即正常的紅系祖細胞，HCMV感染后的紅系祖細胞，以及ATRA和AS2O3處理過的紅系祖細胞和先感染HCMV后用ATRAAS2O3處理的紅系祖細胞中定量表達情況，經過單因素方差分析和SPSS115FWINDOWS統(tǒng)計分析結果顯示，在正常培養(yǎng)體系中紅系祖細胞隨第3天，第7天，第10天時間推移持續(xù)表達HOXB6基因，且表達持續(xù)上調；在HCMV感染后，紅系祖細胞HOXB6基因的表達隨著第3天，7天，10天時間的推移與空白對照組比較，明顯持續(xù)下調，即表達被抑制；ATRA組與空白對照組比較，能持續(xù)顯著上調紅系祖細胞的HOXB6基因的表達，且隨著第3天，第7天，第10天時間延長，表達量逐漸升高；ATRA也能上調對HCMV感染后的第3天和第7天紅系祖細胞的HOXB6基因的表達，但是ATRA對HCMV感染后的第10天紅系祖細胞HOXB6基因的表達與空白對照組相比統(tǒng)計學上無顯著差異；AS2O3與空白對照組比較，能隨著時間推移逐漸下調紅系祖細胞和HCMV感染后的紅系祖細胞的HOXB6基因的表達，結果有統(tǒng)計學意義；與HCMV組比較，結果無統(tǒng)計學意義。結論1HOXB6基因在臍血紅系造血祖細胞中持續(xù)穩(wěn)定的表達，且與紅系造血有密切的相關性。2HCMV感染能誘導臍血紅系造血祖細胞HOXB6基因表達下調，HCMV有可能通過調控HOXB6基因表達異常而引起造血系統(tǒng)損害。3ATRA和AS2O3可以調控HOXB6基因的表達。4本實驗采用TRIZOL試劑提取臍血紅系造血祖細胞總RNA，所得產物RNA純度高，完整性好，產物濃度無明顯差異，無DNA污染，操作簡便，適合于從細胞中提取總RNA的實驗。5本實驗采用FQRTPCR技術具有檢測范圍寬，敏感性高，精確度高，無PCR后處理步驟，避免了交叉污染，產出率高，可以進行多重檢測的優(yōu)點，該方法是一種對HOX基因在紅系造血祖細胞表達進行定量或定性研究的理想方法，是當今研究MRNA表達水平較可靠的技術之一。

簡介：河北醫(yī)科大學博士學位論文調肝解毒方藥對癲癇大鼠認知障礙的干預作用研究姓名裴林申請學位級別博士專業(yè)中西醫(yī)結合臨床指導教師李佃貴20070401英文縮寫GLUGABAAⅣ啤AMWMTAESYTEPMTOFTCPUSTMA1RGLUTAMATE谷氨酸GAMAAMINOBUTYRICACIDY一氨基丁酸YAMINO一3HYDROXY一5一METHYL一4一ISOXAZOLEPROPIONATEY．氨基一3．羥基．5．甲基．4．異惡唑丙酸MORRISWATERMAZETESTMORRIS水迷宮試驗ALTEMATIVEELECTROSTIMULUSYMAZETEST交替電刺激Y迷宮試驗ELEVATEDPLUSMAZETEST抬高迷宮試驗OPENFIELDTEST曠場活動試驗DENTATEGYMS齒狀回CAUDATEPUTAMEN尾殼核SHORTTERMMEMORY短時記憶LONGTERMMEMORY長時記憶ADENOSINEAIRECEPTOR腺苷AI受體

簡介：分類號R7722密級⑧單位代碼10422學號M2010075∥菇辦孑碩士學位論文論文題目ANALYTICALSTUDYOFVIRALCORNEALENDOTHELIITIS病毒性角膜內皮炎的I臨床分析作者姓名ASADMUHAMMAD學院名稱MEDICALUNIVERSITY專業(yè)名稱OPHTHALMOLOGY指導教師PROFESSORXINYIWU合作導師2013年5月4E1SHANDONGUNIVERSITYMASER’STHESIS目錄中文摘要5英文摘要7符號說明8前言9資料和方法12結果14討論21結論22綜述23綜述參考文獻55致謝64刊物65

簡介：重慶醫(yī)科大學碩士學位論文編碼小鼠PGC1Α基因的重組腺病毒的構建和鑒定姓名馬仕坤申請學位級別碩士專業(yè)內科學（內分泌）指導教師李啟富20070401重慶醫(yī)科大學碩士研究生論文DNASEDNTPEBEDTAFCSGFPHRPIGO嗍BATUCP1LEPTMPGCNRF1MTL下AUGLLL喇STAEDEOXYRIBONUCLEASCDEOXYRIBONUCLEOSIDETRIPHOSPHATEENLIDIUMBROMIDEETHYLENEDIAMINETETRAACETICACIDFETALEALFSERUMGREENFLBORESEENCEPROTEINHORSERADISHPEROXIDASEIMMUNOGLUBULINWHITEADIPOSETISSUEBROWNADIPOSETISSUEPEROXISOMEPROLIFERATORACTIVATEDRECEPTORFFCOACTIVATORNUCLEARRESPIRATORYFACTORSMITOCHONDRIALTMSCRIPTIONFACTORMICROGRAMMIEROLITRETRISHYDROXYMETHYLAMINOMETHANETRIS／ACCTATEELECTROPHORESISBUFFER2DNA酶三磷酸脫氧核糖核苷溴乙錠乙二胺四乙酸胎牛血清綠色熒光蛋白辣根過氧化物酶免疫球蛋白白色脂肪組織褐色脂肪組織線粒體內膜解偶聯(lián)蛋白1瘦素過氧化物酶增殖體激活受體輔激動子核呼吸因子1線粒體轉錄因子A微克微升三羥甲基氨基甲烷THS／乙酸電泳緩沖液

簡介：目前國內外對HBV宮內感染的機制尚不清楚治療也很難奏效因此研究HBV宮內感染發(fā)生的機制及其影響因素篩查高危孕婦探討有效的阻斷措施切斷傳播途徑將對控制和預防乙肝有著十分重要的意義普遍認為HBV宮內感染的途徑為經胎盤傳播及經精子傳播其中經胎盤傳播是主要途徑但其機制不清該研究在病例選擇上排除經精子傳播的可能通過檢測HBSAG陽性孕婦外周血、胎盤、新生兒臍血感染HBV的情況探討HBV宮內感染經胎盤傳播的機制及其影響因素為防治HBV宮內感染提供理論依據該研究表明1、胎盤感染是HBV經胎盤傳播導致宮內感染的必要條件即首先感染胎盤再進一步感染胎兒但如何感染胎兒其具體機制還不清楚有待于今后進一步研究2、HBSAG陽性、HBCAG高滴度是宮內感染的主要影響因素可將其作為產前檢查方法篩查高危人群3、用ELISA倍比稀釋法檢測HBSAG滴度方法科學、簡便、實用性強孕婦對周血HBSAG滴度11000時傳染性強應警惕宮內感染的發(fā)生4、HBCAG是一項新的反映HBSAG陽性孕婦外周血HBV傳染性的指標它與HBVDNA陽性符合率極高并具有相同的特異性HBCAG的檢測不需要特殊的設備儀器與檢測HBVDNA相比前者操作簡便經濟實用更適合各大、中、小型醫(yī)療單位應用

簡介：目的構建免疫豁免分子HLAG和FASL的慢病毒表達載體，經過293T細胞包裝后感染人胚胎干細胞HUMANEMBRYONICSTEMCELL，HES，篩選出能穩(wěn)定表達HLAG和FASL的HES細胞陽性克隆，分別建立能夠穩(wěn)定地構成性表達HLAG、FASL和HLAGFASL的HES細胞系，為進一步研究這些細胞系的生物學特性，并最終建立免疫豁免的人類組織工程種子細胞奠定基礎。方法⑴HLAG慢病毒表達載體的構建從正常孕婦剖宮產后胎盤提取總RNA，用逆轉錄酶反轉錄成為CDNA，設計對應引物PCR擴增出HLAG產物并回收將目的基因片段與帶有EGFP熒光標記和新霉素篩選標記的EXNEGLV183空白載體連接為重組HLAG慢病毒表達載體EXHLAGLV183并測序。⑵FASL慢病毒表達載體的構建設計引物從EXL0009M02載體上分離出FASL片段并進行PCR擴增，將回收的目的片段與帶有MCHERRY熒光標記和嘌呤霉素篩選標記的的EXNEGLV111空白載體連接為重組FASL慢病毒表達載體EXFASLLV111并測序。⑶重組慢病毒表達載體的包裝將上述構建的兩種表達載體分別與HIVPACKINGMIX包裝質粒按1∶1稀釋于OPTIMEM培養(yǎng)液中，并與同樣稀釋于OPTIMEM中的25倍含量的LIPOFECTAMINE2000脂質體混合后轉染293T細胞6小時，換液后48小時觀察熒光判斷包裝效率并提取上清液測定滴度。⑷HES的擴增人胚胎干細胞HES接種于經絲裂霉素處理的飼養(yǎng)層MEF上，在含20％KNOCKOUTSR血清，78％DMEMF12培養(yǎng)液，1％NEAA，1％L谷氨酰胺以及01％Β巰基乙醇和BFGF的培養(yǎng)液中培養(yǎng)，每天換液一次，每34天按1∶2比例傳代擴增一次。⑸HLAGFASL慢病毒感染HES細胞將病毒液和溴化季銨陽離子POLYBRENE加入到無飼養(yǎng)層條件下培養(yǎng)的HES中培養(yǎng)2小時后補加同體積病毒液，2小時后離心HES23次后加到飼養(yǎng)層上常規(guī)培養(yǎng)。48小時后觀察熒光表達。結果①經過電泳及測序鑒定成功構建了含有EGFP熒光標記和新霉素篩選標記的重組HLAG慢病毒表達載體EXHLAGLV183。②經過電泳及測序鑒定成功構建了含有MCHERRY熒光標記和嘌呤霉素篩選標記的重組FASL慢病毒表達載體EXFASLLV111。③包裝載體過程中摸索發(fā)現(xiàn)在載體與轉染試劑比例為1∶25且轉染時間為6小時的情況下，表達載體包裝效率最高。在此條件下包裝質粒并提取病毒上清液，用孔稀釋法測定兩種載體包裝后的病毒滴度分別為10109TUML和53108TUML，具備感染目的細胞的條件。④MEF飼養(yǎng)層細胞的制備將取自孕135天的小鼠胚胎的胚胎成纖維細胞（MOUSEEMBRYONICFIBROBLAST，MEF）進行傳代培養(yǎng)至23代，當細胞匯合度到達80％時用濃度為10ΜGML的絲裂霉素C處理2小時可明顯抑制MEF的分裂，形成利于HES細胞生長的飼養(yǎng)層細胞。⑤HES細胞的培養(yǎng)在含有飼養(yǎng)層細胞的條件下每天換液可保證絕大多數細胞在45天內不斷生長且不發(fā)生分化。在無飼養(yǎng)層條件下，HES細胞在MATRIGEL處理過的細胞培養(yǎng)板上可貼壁生長至細胞匯合度到達40％。⑥分別用HLAG，F(xiàn)ASL慢病毒液感染HES細胞，感染48H后在熒光顯微鏡下可觀察到帶有相應熒光標記的陽性細胞。結論⑴本實驗使用總RNA提取和反轉錄PCR的方法可以從人胎盤組織中擴增出HLAG目的基因片段，并成功構建了HLAG重組慢病毒載體EXHLAGLV183。⑵本實驗使用PCR方法可以從含有目的基因片段的哺乳動物真核表達載體中擴增出FASL目的基因片段，并成功構建了FASL重組慢病毒載體EXFASLLV111。⑶本實驗摸索出在慢病毒載體與轉染試劑LIPOFACTAMINE2000比例為1∶25且轉染時間為6小時的情況下，包裝效率最高且可以收集獲得較高的病毒滴度。⑷HES細胞在MATRIGEL處理過的培養(yǎng)板上可以貼壁生長，雖然比在相同培養(yǎng)液條件下飼養(yǎng)層細胞上的生長狀態(tài)要差，但仍可以進行短時間的培養(yǎng)與擴增。⑸利用本實驗所制得的含有HLAG和FASL慢病毒質粒的病毒液均可以成功感染HES細胞，并獲得含有HLAG和FASL目的基因片段的HES細胞。

簡介：第一軍醫(yī)大學博士學位論文用LMP1構建重組慢病毒載體及建立轉基因小鼠模型姓名楊玉芳申請學位級別博士專業(yè)病理學指導教師丁彥青20040518用LMPL構建重組慢病毒載體及建立轉基因小鼠模型博士研究生導師楊玉芳丁彥青教授中文摘要EB病毒與多種人類腫瘤相關，尤其與鼻咽癌密切相關，但由于缺乏實驗動物學方面的證據，EB病毒在鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展中所起的作用一直是研究的熱點。但至今尚未能用EB病毒或其致瘤基因建立鼻嘲癌動物模型，分析原因，我們認為主要與沒有利用鼻咽組織相對特異性啟動子有關。為了解決這一問題，本研究利用嗜上皮細胞特異性啟動子EDL2，攜帶增強型綠色熒光蛋白報告基因ENHANCEDGREENFLUORESCENTPROTEIN．EGFP與EB病毒潛伏膜蛋白LMPL，構建融合蛋白基因載體。本研究擬分別構建EDL2一EGFP慢病毒表達載體、EDL2．N．LMPLEGFP慢病毒表達載體、EDL2一B．LMPL．EGFP慢病毒表達載體；將EB病毒潛伏膜蛋白LMPL與增強型綠色熒光蛋白EGFP作為目的基因，通過顯微注射技術，建立攜帶靶基因的轉基因小鼠，為進一步建立鼻咽癌動物模型探索新途徑。研究內容及結果如下一、成功構建了ED．L2一EGFP慢病毒載體、EDL2一NLMPL．EGFP慢病毒載體、EDL2．BLMPLEGFP慢病毒表達載體以PEDL2一NLMPL質粒為模板，通過PCR法擴增ED．L2啟動予序列，上游57端引入PACI酶切位點，下游57端引入BAMHI酶切位點，PCR產物膠回收純化與PUCLL8載體16。C進行連接。利用基因重組技術，首先將EDL2啟動子序列克隆入慢病毒載體，然后分別將N．LMPL及BLMPL克隆入含E1一L2啟動子的慢病毒載體中。抽提質粒，重組載體酶切鑒定、基因測序，選

簡介：目的探討異丙酚復合芬太尼全憑靜脈麻醉與硬膜外麻醉兩種不同的麻醉方法對青年患者小手術后認知功能的影響。方法收集石河子大學醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院擇期行小手術（手術時間結果1T2時，三組出現(xiàn)認知功能受損病例為33例，在所有觀察者中占367％。其中，對照組、全麻組和硬膜外組中發(fā)生為133％430，567％1730和40％1230，T3時已基本恢復。與對照組比較，全麻組和硬膜外認知功能受損病例明顯增高P00010039而后兩組之間差異無統(tǒng)計學意義P005。2T2時，三組出現(xiàn)術后認知功能患者共5例，占56％。其中，對照組、全麻組和硬膜外組中發(fā)生了33％130，67％230和67％230。卡方檢驗顯示，不同組內出現(xiàn)認知功能障礙的病例之間沒有統(tǒng)計學意義Χ2046，P005。T3時，對照組中出現(xiàn)1例，其余兩組得分已基本恢復至術前水平。3T1和T3時，抑郁自評量表得分顯示與對照組比較，全麻組、硬膜外組間差異均無統(tǒng)計學意義P026，P071；與T1時比較，麻醉組得分稍有降低，但沒有明顯差異P005。4六項分測定中，聯(lián)想學習兩次信度系數分別為020和042，其余分布在064085之間。結論1青年患者，在全身麻醉或硬膜外麻醉下施行小手術后，術后3天均可影響記憶力、注意力計算力某項功能，出現(xiàn)一過性的減退，但并不能導致認知功能障礙的發(fā)生，且術后30天測定表明受損功能已基本恢復。2圍手術期，青年患者可出現(xiàn)輕度的情緒波動，但均能通過自我調節(jié)的方式有效疏導和緩解。3六項分測驗中，累加、視覺再認、算術、數字廣度和數字符號不同時間測定的穩(wěn)定性好，準確性高。其中，視覺再認學習效應較為明顯，實施時應考慮適當延長間隔時間。

簡介：目的檢測分析正常人淋巴細胞和體外EBV轉化淋巴母細胞兩者宿主細胞差異表達基因篩選發(fā)現(xiàn)EBV誘導淋巴細胞轉化的候選關鍵基因探討EBV誘導淋巴細胞轉化的分子機制。方法采集7例健康獻血員新鮮外周靜脈血分離出人淋巴細胞在體外利用EBV誘導淋巴細胞轉化建立淋巴母細胞模型分別保存正常人淋巴細胞與體外EBV轉化淋巴母細胞。采用AGILENT444K人類全基因組表達譜芯片檢測、比較分析正常人淋巴細胞與體外EBV轉化淋巴母細胞的宿主細胞差異表達基因篩選出FOLDCHANGE≥2的基因為表達顯著上調基因FOLDCHANGE≤05為表達顯著下調基因。采用實時定量PCR驗證基因芯片檢測結果。結果1EBV轉化后的淋巴細胞永生化經傳代培養(yǎng)和顯微鏡下觀察獲得體外EBV轉化的淋巴母細胞模型。利用LIMMA算法以TTESTP〈00001篩選差異表達基因共篩選出2916個明顯差異表達PROBES其中上調基因1328個下調基因1007個581個PROBES在HUGO未映射有基因含EST65個系統(tǒng)構建了7例同源正常淋巴細胞NM和體外EBV轉化淋巴母細胞TRANS的宿主細胞差異基因表達譜。HIERARCHICALCLUSTERING分析顯示差異表達基因能夠很好地區(qū)分正常淋巴細胞和EBV轉化淋巴母細胞。2差異表達基因的生物信息學分析GENEONTOLOGY分類中BP分析顯示共958個上調基因參與272個BP分類其中與細胞周期和有絲分裂相關的“MPHASE”“CELLCYCLEPROCESS”“CELLCYCLEPHASE”“CELLCYCLE”“MITOTICCELLCYCLE”“MPHASEOFMITOTICCELL”“MITOSIS”“NUCLEARDIVISION”和“GANELLEFISSION”等10個BP分類EASESCE最低均870個上調基因參與82個MF分類其中主要涉及基因和蛋白結合活性如“ADENYLNUCLEOTIDEBINDING”“ATPBINDING”“NUCLEOSIDEBINDING”“PURINENUCLEOSIDEBINDING”和“NUCLEOTIDEBINDING”的EASESCE得分最低均利用“KEGGPATHWAY”“BIOCARTA”和“REACTOME”數據庫進行PATHWAY分析顯示當EASESCE將上調和下調差異表達基因涉及的生物學功能進行“FUNCTIONALANNOTATIONCLUSTERING”分析結果顯示上調基因涉及的生物學功能分類聚集為73個集合其中ENRICHMENTSCE分數最高的功能集合主要涉及細胞周期和細胞分裂下調基因涉及的生物學功能分類聚集為71個集合ENRICHMENTSCE分數最高的功能集合主要涉及細胞凋亡。利用STRINGGENERANKPATHWAY及GO分類等生物信息學軟件綜合分析差異表達基因并按照基因的權重度排序分選出排序前100位差異表達基因其中上、下調基因各50個。對此100個基因進行生物學功能分析及預測上調基因IGF1GOT2GOT1AURKBCDK2AURKABRCA1PLK1KIF20AKIF18B等主要參與“CELLCYCLE”“MITOSIS”“PROTEINBIOSYNTHESIS”“CHROMOSOMESEGREGATION”等生物學過程上調基因E2F1PTPN11PIK3R3PLCG2下調基因FOSPXNPRKCQFYNZAP70PROK2FCN1HCK等則與腫瘤相關信號通路密切相關如“P53PATHWAY”“ANGIOGENESIS”“VEGFSIGNALINGPATHWAY”“FGFSIGNALINGPATHWAY”“IGFPATHWAYPROTEINKINASEBSIGNALINGCADE”等下調基因CD3GCD3DCD247S100A8CD4GZMAITKCLUGZMHGZMK等主要與細胞凋亡、機體免疫調節(jié)、應激等生物學過程有關如“APOTOSIS”“TBCELLACTIVATION”“IMMUNESYSTEMPROCESS”“RESPONSETOSTIMULUS”等。其中部分基因如E2F1PLK1PTPN11FOSIGF1CDK2等參與多種生物學行為。3綜合信號通路、基因生物學分類、基因間相互作用分析與預測結果提示EBV可上調宿主細胞E2F1PLK1BIRC5等調控細胞周期及細胞凋亡上調宿主細胞PTPN11等促進腫瘤血管生成與分化下調宿主細胞FYN等降低宿主細胞免疫功能。4實時定量PCR檢測結果顯示經內參校正后與正常人淋巴細胞相比E2F1PTPN11PLK1BIRC5轉錄水平在EBV轉化淋巴母細胞表達上調FYN轉錄水平在轉化淋巴母細胞表達下調結果與基因芯片檢測結果一致。結論1首次構建了正常人淋巴細胞和體外EBV轉化淋巴母細胞的差異基因表達譜首次發(fā)現(xiàn)正常淋巴細胞和轉化淋巴母細胞的宿主細胞基因表達模式存在明顯差異。2表明EBV轉化淋巴細胞是一個多基因參與多通路涉及、病毒基因與宿主基因相互作用的過程。推測EBV主要通過促進細胞周期和阻礙宿主免疫功能誘導淋巴細胞轉化。3推測E2F1PLK1PTPN11BIRC5FYN是EBV誘導淋巴細胞轉化的關鍵分子其中E2F1可能在細胞周期、細胞凋亡、端粒末端轉移酶活性等途徑中具有中樞作用。

簡介：西南大學碩士學位論文人乳頭瘤病毒11型全基因組轉基因小鼠基因元件的設計與構建姓名張一申請學位級別碩士專業(yè)基礎獸醫(yī)指導教師黎曉敏20070601西南大學碩士學位論文基因E6的轉錄水平。研究結果1用核酸凝膠電泳和測序的方法驗證所構建的質粒C與實驗設計的相符。2轉染入角質形成細胞后實驗組觀察到熒光表達。3RTPCR檢測HPVLLE6在轉錄水平上的表達為陽性。4轉染的角質形成細胞和對照組的角質形成細胞相比，傳代次數增加了3倍。結論體外初步檢驗表明，構建的序列保留了野生型HPVLL的致病特點，并且CRE／LOXP系統(tǒng)能夠在細胞內將HPVLL切割為游離狀態(tài)，同時使熒光蛋白有效表達。因此，在質粒C上的這段序列具備了制作HPVLL轉基因小鼠病理模型的潛力。關鍵詞HPVLL轉基因CRC／LOXP可控表達Ⅱ

簡介：流感作為一種常見病和多發(fā)病對人類健康危害極大，而目前臨床用于治療乙肝的藥物療效卻不是十分讓人滿意。CLEVUDINE具有顯著抗HBV活性同時沒有明顯的毒性，尤其是它對病毒的持續(xù)抑制作用可以保持至停藥后6個月，這是其它抗乙肝病毒藥物無法相比的。另外和其它抗乙肝藥物聯(lián)合使用可以使抗乙肝病毒療效提高。因此CLEVUDINE最近被認為是治療慢性乙肝病毒感染的臨床候選藥物之一。已報道的CLEVUDINE的合成方法主要有三種，在參考文獻的基礎上，本課題擬訂了一條較為合理的合成路線，并對合成進行了工藝改進，以新型氟代劑ET3N3HF取代KHF2和48％HF進行氟代反應，使反應條件大大改善。本課題還在減少反應步驟，提高了反應收率方面進行了嘗試，最終，以左旋核糖為原料經9步反應合成目標化合物CLEVUDINE，反應總收率為5％。

簡介：作為近幾年興起于西方的性別研究的重要一支，性別操演理論對改變人們關于性別本質的深層思維方式和認知模式具有重要的戰(zhàn)略意義。1990年朱迪斯巴特勒在性別麻煩中首次提出了性別操演理論，其根本目的在于解構性別的本體概念，同時將性別建構為流動性的和過程性的身份。不論是在性別研究領域，還是在女性主義文學領域，性別操演理論均起到了顛覆性的作用。本論文旨在探索運用性別操演理論分析性別、種族、文化等邊緣身份話題的適用性，同時借用紫色、骨、孫行者、中國娃娃等美國少數族裔文本研究性別操演理論在文學文本中的適用性和局限性，進一步推進性別操演理論的研究。本論文分為五個部分第一部分介紹了朱迪斯巴特勒和她提出的性別操演理論以及其他學者對性別操演理論的相關研究，主要介紹了兩種相關理論，即身份扮演理論和社會角色構建論，解釋了一些對于性別操演理論的誤解，澄清理論本質。第二部分借用文學文本紫色分析性別操演理論對性別身份認知的指導作用。在闡述黑人女性茜莉在惡劣的社會環(huán)境下進行自我性別認知的過程的同時，進一步闡述男性同樣受到社會規(guī)范的限制和壓抑，從而推翻了傳統(tǒng)性別的二元對立模式，提出性別消解才是解決性別身份認知問題的有效方式。第三部分將性別操演理論從性別的單一范疇拓展到種族范疇。利用性別與種族問題的相關性將操演理論運用到對種族問題的探究。借助亞裔美國作家伍慧明的骨、湯亭亭的孫行者和黃準美的中國娃娃，全方位探討個人種族身份扮演和群體種族身份扮演等問題，開啟種族身份認知的新視角。第四部分闡述性別操演理論對于當代性別研究的進一步發(fā)展。認為性別操演理論的提出拓展了性別研究范疇，區(qū)分了性別的規(guī)定性和述行性差異，探索了性別與其他邊緣身份研究的動態(tài)關系。第五部分對全文進行了總結。性別操演理論作為當代西方性別研究的重要一支，對傳統(tǒng)研究范疇的固化模式進行了反思，同時彌補了其對于其他邊緣群體的忽視，推動了當前西方性別研究的進一步發(fā)展。本論文將性別操演理論從單一的性別范疇進一步延伸到種族身份認知的探究中，擴大了性別操演理論的適用范圍，同時運用性別操演理論研究非洲族裔和亞洲族裔女性文學文本，為族裔文學提供了新的視角。此外，在對四部族裔作品進行并置分析的同時，試圖發(fā)現(xiàn)少數族裔的群體身份特征。促進少數族裔的個人身份認知和集體身份認知。